论文部分内容阅读
目的:观察高糖对体外培养的ARPE-19细胞TLR2表达的影响及机制。(1)利用RealtimePCR技术探讨TLR2mRNA在不同D-葡萄糖浓度下培养人视网膜色素上皮细胞(retinalpigmentepithelialcell,RPE)中的表达。(2)利用Westernblot技术探讨不同D-葡萄糖浓度和PKC-α抑制剂对RPE细胞TLR2蛋白和PKC-α从细胞浆向细胞膜转位情况的影响。(3)初步探讨TLR2与糖尿病视网膜病变(diabetesretinopathy,DR)的相关性,高糖对ARPE-19细胞TLR2表达的影响以及机制,为相关疾病的诊断治疗提供新的思路。方法:1.培养ARPE-19细胞。2.取第16~20代人RPE细胞用于实验,各组ARPE-19(RPE细胞系)细胞分别刺激48h,正常糖浓度组(5.5mmol/LD-葡萄糖)、中度高糖组(15.5mmol/LD-葡萄糖)、高糖组(25.5mmol/LD-葡萄糖)、PKC-α抑制剂组(25.5mmol/LD-葡萄糖加10mmol/LGo6976PKC-α抑制剂)、高渗对照组(5.5mmol/LD-葡萄糖加20mmol/L甘露醇)。3.Real-TimePCR分析各组ARPE-19细胞TLR2的mRNA表达水平。4.WesternBlot检测各组ARPE-19细胞TLR2蛋白表达水平,以及PKC-α蛋白胞浆向胞膜的转位情况。结果:与正常糖浓度组ARPE-19细胞相比,高糖组ARPE-19细胞和中度高糖组ARPE-19细胞TLR2的mRNA和蛋白表达,以及PKC-α从细胞浆向细胞膜的转位均增加(P<0.05),并且高糖组ARPE-19细胞高于中度高糖组ARPE-19细胞(P<0.05)。与高糖组ARPE-19细胞比较,PKC-α抑制剂组ARPE-19细胞的TLR2蛋白表达降低(P<0.05),同时PKC-α蛋白从细胞膜向细胞浆转位情况显著降低(P<0.01)。结论:1.人ARPE-19细胞有TLR2蛋白表达。2.高糖可以上调ARPE-19细胞TLR2的表达,并且随着糖浓度的升高TLR2表达也升高。3.PKC-α抑制剂可以部分拮抗高糖上调ARPE-19细胞TLR2表达的作用。4.高糖可能是通过增加PKC-α从细胞浆向细胞膜转位,激活PKC-α信号通路,来上调TLR2的表达。TLR2信号通路可能参与糖尿病视网膜病变的发生发展过程,为研究疾病的诊治提供新的思路。