EPO通过其受体βcR促进胶质瘤快速增殖的作用研究

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目的:  探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是否通过与其受体PcR(common beta-subunit heteroreceptor)的结合,发挥促进胶质瘤快速增殖的作用。  方法:  通过免疫组化法检测EPO、PcR在人各病理级别胶质瘤标本组织中的表达差异;靶向沉默U87胶质瘤细胞株的PcR基因,采用空载质粒及稳定沉默PcR的胶质瘤细胞株建立裸鼠皮下移植瘤模型,分为对照组、EPO处理组及PcR沉默+EPO处理组,监测肿瘤生长速度差异及瘤体中EPO与CyclinDl表达变化;体外实验分为对照组、EPO处理组及PcR沉默+EPO处理组,分别使用Westernblot检测各组细胞间CyclinDl的表达变化、CCK-8法测各组细胞生长曲线变化、平板克隆形成实验检测各组细胞克隆速度差异。  结果:  人胶质瘤标本中,高病理级别组EPO的表达比低级别组高(P=0.0016),同时高病理级别组中的PcR表达也比低级别组高(P=0.0028)。裸鼠皮下成瘤实验中,与对照组相比,EPO处理组(P=0.0013)和βcR沉默+EPO处理组(P=0.0022)中的移植瘤均高表达EPO蛋白;成瘤结果显示:EPO处理组的移植瘤生长速度较对照组明显增快,移植瘤质量更重(P=0.0026),体积更大(P=0.0030),同时EPO处理组的CyclinDl蛋白的表达也明显髙于对照组(P=0.0056);而PcR沉默+EPO处理组瘤体生长速度则明显较慢,移植瘤质量(P=0.0011)与体积(P=0.0010)均低于EPO处理组,同时βcR沉默+EPO处理组的CyclinD1蛋白表达也明显低于EPO处理组(P=0.0044)。体外实验:经EPO处理的细胞,CyclinDl的蛋白表达水平明显较对照组增髙(P=0.0108),同时细胞增殖速度显著增快(P3d/5d=0.0200/0.0280,Pcoione=0.0320),而PcR沉默+EPO处理组细胞中CyclinDl的蛋白表达水平则较EPO处理组明显降低(P=0.0095),同时细胞增殖速度呈现明显下降(P3d/5d=0.0079/0.0090,PCdone=0.0080)。  结论:  本研究发现EPO可通过与其受体βcR结合并相互作用,上调CyclinDl的表达,促进胶质瘤的快速增殖。
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