Zwittermicin A的分离纯化及其稳定性的初步研究

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本研究从苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种D1-23(Bacillus thuringiensis.subsp.kurstaki)发酵液中分离纯化出活性物质Zwittermicin A,建立了新的Zwittermicin A(双效菌素)的分离纯化和检测方法。研究了Zwittermicin A热稳定性和酸碱稳定性,建立了Zwittermicin A的衰减模型y=kebx,并对双效菌素的保护剂和对Bt原粉的增效作用进行了初步研究。 苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种D1-23发酵液经微滤除去菌体,经超滤除去大分子物质,得到含双效菌素上清液。再通过离子交换法,用D113树脂吸附上清液,然后用NH4H2PO4溶液进行第一次冲洗,不同pH值CH3COONH4溶液进行第二次冲洗,氨水洗脱后在45℃下旋转蒸发,得到含活性物质的提取液。最后通过HPLC-MS纯化和制备,得到2.89mg Zwittermicin A纯品。紫外检测冲洗效果表明:离子交换第一次冲洗液NH4H2PO4的最适浓度为5mmol/L,第二次冲洗液CH3COONH4的最适浓度为30mmol/L,梯度冲洗pH值为8.0~9.5;经离子交换法分离纯化后总收得率达93%。 通过对双效菌素的热稳定性和pH值稳定性实验建立了双效菌素的衰减模型y=kebx。该模型可靠性高、应用范围广,对20℃~100℃、pH3.0~pH12.0下Zwittermicin A的降解都适用。双效菌素的热稳定性和pH值稳定性实验表明:双效菌素对热敏感,在20℃~100℃范围内温度越高半衰期越短;在25℃下,pH值2.0~12.0范围内pH值越低,双效菌素的稳定性越强。 温度对含双效菌素发酵液喷雾过程中双效菌素活性的影响。进风口温度160℃和170℃时,喷雾干燥后抑制圈大小相同,均为10.8mm。高于170℃时抑制圈变小,双效菌素损失变大。由于喷雾干燥温度高时喷雾速度快、原粉含水量少,有利于原粉的保存。所以选170℃较为合适。 双效菌素的保护剂研究表明Ca2+和Ba2+对发酵液中的双效菌素有保护作用,而对除去菌体后的上清液无保护作用。Ca2+浓度为1%,Ba2+浓度为1.5%时保护作用最佳。 将含双效菌素的上清液与Bt原粉复配,测定双效菌素对喷雾后Bt原粉的增效倍数。结果表明双效菌素对甜菜夜蛾的增效倍数为4.88倍,对棉铃虫的增效倍数为3.79倍。双效菌素对甜菜夜蛾的增效效果要好于棉铃虫。
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