【摘 要】
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目的筛选乌苏里瓦韦（Lepisorus ussuriensis（Regel et Maack）Ching）抗类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）主要活性成分,并对其进行提取纯化,确定其对大鼠佐剂性关节炎的药效及作用机制,为乌苏里瓦韦在临床上治疗RA提供科学依据,也为乌苏里瓦韦的推广和应用提供了理论基础。方法（1）利用网络药理学方法筛选乌苏里瓦韦抗RA的理论活性成分。（2
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目的筛选乌苏里瓦韦（Lepisorus ussuriensis（Regel et Maack）Ching）抗类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）主要活性成分,并对其进行提取纯化,确定其对大鼠佐剂性关节炎的药效及作用机制,为乌苏里瓦韦在临床上治疗RA提供科学依据,也为乌苏里瓦韦的推广和应用提供了理论基础。方法（1）利用网络药理学方法筛选乌苏里瓦韦抗RA的理论活性成分。（2）利用超声辅助提取法,以超声功率、超声温度、超声时间、料液比为考察指标进行单因素实验,通过响应面工艺优化得出乌苏里瓦韦总黄酮的最佳提取工艺;利用D101型大孔树脂对乌苏里瓦韦总黄酮进行纯化。（3）皮下注射弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant,FCA）建立大鼠佐剂性关节炎模型,将实验动物分为空白对照组（CG）、模型组（MG）、甲氨蝶呤组（WPG）、雷公藤多苷组（CPG）、乌苏里瓦韦总黄酮高剂量组（LHG）、乌苏里瓦韦总黄酮低剂量组（LLG）,定期监测大鼠的体重、足趾肿胀度变化,计算大鼠胸腺、脾脏、肝脏、肾脏的脏器指数,检测各组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量,对各组大鼠踝关节进行HE染色和组织形态学观察。（4）利用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）检测各组大鼠血清中的维生素C（Vitamin C,VC）含量。（5）利用Novaseq 6000 PE250测序平台对大鼠粪便中16S r RNA V3-V4区进行肠道菌群检测分析。结果（1）通过网络药理学推测出乌苏里瓦韦抗RA的主要活性成分为黄酮类化合物。（2）响应面分析法优化乌苏里瓦韦总黄酮最佳提取工艺条件:超声功率360 W、超声温度58℃、超声时间50 min、液料比20∶1,平均提取率为17.944%。将1.3 kg乌苏里瓦韦按此方法进行超声提取,利用D101型大孔树脂进行纯化,得到120.05 g乌苏里瓦韦总黄酮浸膏,含量为55.78%。（3）经乌苏里瓦韦总黄酮治疗后的大鼠摄食积极,状态活跃,体质量均持续增加,皮毛光滑;与CG组比较,MG组大鼠足肿胀度升高,具有极显著差异（p＜0.01）,大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均有显著性升高（p＜0.05）;与MG组比较,LHG组脾脏指数、胸腺指数、肝脏指数、肾脏指数均具极显著差异（p＜0.01）,且与CG组无明显差异;与CG组比较,MG组大鼠踝关节滑膜细胞增生明显,并出现严重软骨损伤及炎性细胞浸润,与MG组比较,LHG组滑膜细胞增生、滑膜组织充血及软骨细胞破坏等病理程度均明显减轻,炎性细胞浸润减少。（4）与CG组比较,MG组、CPG组、LLG组大鼠血清中维生素C含量具有极显著差异（p＜0.01）,WPG组大鼠血清中维生素C含量具有显著差异（p＜0.05）,LHG组无显著差异;与MG组比较,所有治疗组大鼠血清中维生素C含量均具有极显著差异（p＜0.01）。（5）乌苏里瓦韦高剂量总黄酮可上调肠道菌群中Unclassified、Ralstonia（劳尔氏菌属）、Oscillospira（颤螺菌属）菌属丰度,特征菌属为Faecalibacterium（普拉梭菌）、Bacteroides（拟杆菌属）、Bacteroidaceae、Porphyromonadaceae、Parabacteroides、Dialister、Butyricimonas、Eubacterium（真杆菌属）、Sarcina、Gemmiger。结论本研究对从乌苏里瓦韦中筛选得到的抗RA的主要成分总黄酮进行了提取纯化,得到一种简单实用的提取纯化乌苏里瓦韦总黄酮的工艺;实验结果表明乌苏里瓦韦总黄酮对佐剂性关节炎大鼠具有显著的治疗作用,其作用机制可能为上调肠道菌群中Unclassified、Ralstonia、Oscillospira菌属丰度,从而提高佐剂性关节炎大鼠体内维生素C含量,降低TNF-α、IL-1β、IL-6含量进而发挥抗RA作用。
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