论文部分内容阅读
目的:探究经4Gy X射线照射后的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),硫酸镁对其细胞周期、细胞凋亡率的影响,而且探讨分析其可能的分子机制。同时研究硫酸镁对HUVEC中抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平的影响。方法:1.选取符合实验要求的HUVEC,采用流式细胞仪检测硫酸镁对经X射线照射后不同时间HUVEC细胞周期分布的影响;周期蛋白CyclinB1采用流式细胞术和免疫印迹法检测。2.HUVEC细胞凋亡率的测定,采用膜联蛋白双染法(Annexin V/PI);Bcl-2、P53蛋白采用免疫印迹法检测;Bcl-2 mRNA的检测则采用Real Time-PCR法。3.IκB-α蛋白的表达,使用免疫印迹法测定其变化;IκB-αmRNA的表达,使用Real Time-PCR法测定其变化。4.数据均选用均数±标准差表现,使用SPSS 19.0统计学软件,t检验对比组间差异。P<0.05为差别有统计学意义。结果:1.前期试验结果显示:对人脐静脉血管内皮细胞而言,硫酸镁的浓度为1.25mg/mL时,是无毒性的,且X射线照射后,该浓度的硫酸镁能使细胞的存活率增加[26]。2.经X射线照射后,HUVEC会出现G2/M期阻滞,而1.25mg/mL硫酸镁能使其阻滞程度降低。流式细胞术和western blot检测均提示:较单纯照射组相比,照射加药组24h CyclinB1蛋白表达量有一定的升高。3.与空白对照组相比,X射线照射组细胞凋亡率均有不同程度的增加,照射加药组与单纯照射组比较,HUVEC细胞凋亡率增加,提示硫酸镁的浓度在1.25mg/m L时,对X射线照射后的HUVEC,可能促进其凋亡。4.Real-Time PCR结果显示,X射线增加抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表达,而1.25mg/ml硫酸镁能降低其表达水平;免疫印迹法提示单纯照射48h、72h后,Bcl-2蛋白的表达增加,1.25mg/mL硫酸镁能降低Bcl-2蛋白的表达;免疫印迹法检测提示单纯照射72h后,蛋白P53表达量明显增加;与单纯照射组相比,照射72h后HUVEC的P53蛋白的表达,硫酸镁可以促进其蛋白水平的增加。5.Real Time PCR检测提示,X射线能促进HUVEC中IκB-αmRNA的表达,而1.25mg/m L硫酸镁作用后,能促使其表达减少;western blot法提示单纯照射24h、48h后,IκB-α蛋白的表达增加,72h IκB-α的表达下降,1.25mg/mL硫酸镁能降低IκB-α蛋白的表达。结论:1.1.25mg/mL硫酸镁能缓解经X射线照射后HUVEC的G2/M期阻滞;2.HUVEC经X射线照射后,1.25mg/mL硫酸镁能使细胞凋亡率比例增多;3.硫酸镁可能通过抑制IκB-αmRNA的表达,抑制NF-κB的激活,从而阻止NF-κB的核转位来降低Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平,从而促进不能修复的细胞凋亡。