【摘 要】
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目的： 探讨体外分离培养BMSCs的条件,并观察新生大鼠脑组织匀浆液对BMSCs诱导分化的影响。 方法： 1.选用健康SD大鼠,用贴壁培养法分离纯化BMSCs,显微镜下观察细胞的形
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目的： 探讨体外分离培养BMSCs的条件,并观察新生大鼠脑组织匀浆液对BMSCs诱导分化的影响。 方法： 1.选用健康SD大鼠,用贴壁培养法分离纯化BMSCs,显微镜下观察细胞的形态和生长特性,采用流式细胞学技术检测BMSCs细胞表面抗原分子,通过免疫表型鉴定BMSCs。 2.取第3代BMSCs,采用贴壁培养法诱导向神经方向分化,实验分为空白对照组和新生大鼠脑组织匀浆液诱导组,对照组用L-DMEM培养基继续培养,诱导组用新生大鼠的脑组织匀浆液培养,连续培养7d。 3.诱导后采用倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用RT-PCR技术检测神经细胞表面标志物的表达。 结果： 1.利用贴壁法传代培养的BMSCs,细胞形态比较均一,细胞形态呈成纤维样或纺锤样,成漩涡状或簇状生长;流式细胞学检测结果显示BMSCs稳定表达表面分子CD90(95.3％),CD29(99.9%),几乎不表达造血系统表面分子CD45(0.1%),CD11(3.8%),CD90和CD29的双阳性共表达率可达97.6%,CD45和CD11b的双阳性共表达率为0.1%。 2.诱导后的BMSCs倒置显微镜下观察细胞形态呈现神经细胞样改变,RT-PCR检测结果显示新生大鼠脑组织匀浆诱导组BMSCs表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经微管蛋白(β-Ⅲ-tubulin)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。 结论： 1.采用全骨髓贴壁培养方法,可以获得较高细胞纯度,操作简单易行,是一种较为理想的培养BMSCs的方法。 2.新生大鼠脑组织匀浆液可以促进BMSCs向神经方向分化。
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