超低温冷冻技术可以长久保存动物精子，但是冻融的过程中会严重影响精子的生理功能和形态特征。冻融过程中精子会受到氧自由基的攻击，这将直接改变膜的理化性质，对线粒体活性造成损伤从而影响其活力，同时会造成蛋白质表达量和功能的改变，最终导致不能成功受精。而褪黑素可以去除氧自由基，起到抗氧化保护作用，从而减少对精子带来的氧化性损伤。本论文以绵羊同一批次添加1mM褪黑素的实验组与不添加褪黑素的空白对照组的两组冻融后精子作为实验材料，利用2-DE构建了冷冻前添加褪黑素对绵羊精子冻融后两组蛋白质的差异蛋白图谱。最后用PDQuest8.0分析软件对凝胶图谱蛋白质点进行分析，并检测差异蛋白。结果显示：（1）精子冷冻保护液中褪黑素添加浓度为1mM时比不添加褪黑素的解冻后精子活率高，用17cm(pH3～10)胶条对绵羊精子蛋白进行试验，经考马斯亮蓝染色后最适上样量为0.45mg。（2）在两组凝胶上共检测到12个差异蛋白质斑点，在添加褪黑素的实验组凝胶上表达上调的蛋白质斑点有5个，表达下调的有7个。差异蛋白质斑点经鉴定，在国际生物信息学中心数据库搜索到相对应的5种蛋白质。它们分别芳基硫酸酯酶A、α-烯醇酶3、21号染色体开放阅读框33、线粒体超氧化物歧化酶2和cAMP依赖蛋白激酶类。