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用尿酸酶法测定血清中尿酸水平可分为间接尿酸酶法和直接尿酸酶法，间接尿酸酶法中，用尿酸酶偶联上醛脱氢酶和过氧化物酶的动力学方法效率高，缺点是成本高，干扰因素较多，使其很难在临床上应用推广。目前的直接尿酸酶法只有终点平衡法，受0.40mmol/L以上血清黄嘌呤等少数物质干扰，对大多数其余血清成分有抗性，曾是IFCC推荐的参考方法。用过氧化物酶偶联尿酸酶再加上不同的显色剂称为间接终点平衡法，则因为重复性好，操作简便，节约成本等特点在临床上得到了广泛地应用，但最大的干扰因素来自于血清中的黄嘌呤。我们已克隆了苛求芽孢杆菌胞内尿酸酶基因并已申请其发明专利(专利受理号200910103741.1)，此酶用于直接动力学法尿酸测定时可对1.50mmol/L黄嘌呤有抗性。本课题的研究目的是考察此尿酸酶在间接终点平衡法应用中的最适条件，对其诊断性能进行详细地评价，建立尿酸试剂盒的初步模型。优化后的试剂最适条件如下：R1两份(PBS6.0) R2一份(PH9.2硼砂)HRP2.7U/ml(1.8U/ml) uricase1.2U/ml(0.4U/ml)4-AAP0.45mmol/L(0.3mmol/L) Toos4.2mmol/L(1.4mmol/L)NaN30.05%NaN30.05%按照NCCLS的相关要求，对自主研制的尿酸试剂的各个诊断性能进行了详细地评价：检测限LOD=LOB+1.65SD=14.4umol/L；线性范围：0-1600umol/L线性方程：Y=0.0003X-0.0012, R~2=0.9971；可报告范围：14.4-3510umol/L；批内精密度为2.2%和3.0%，批间精密度为4.0%和4.8%；试剂保存的稳定性可达半年以上，参考区间：男206-426umol/L,女145-336umol/L；胆红素浓度≤320umol/L，抗坏血酸浓度≤0.4mmol/L，血红蛋白浓度≤4g/L时，对尿酸测定结果没有明显干扰；与中生北控尿酸试剂进行方法学比较：直线方程y=0.9506X-1.2647，R~2=0.9956。在抗黄嘌呤干扰方面：中生北控尿酸试剂盒、成都迈克尿酸试剂盒、新城生物尿酸试剂盒、自制尿酸试剂盒在黄嘌呤浓度为0-1.2mmol/L时测定结果都没有明显干扰。而真核尿酸试剂在黄嘌呤浓度>0.3mmol/L时，即对测定结果有明显的负干扰。以上实验证明实验室自制原核表达的尿酸酶试剂比真核表达的尿酸酶在抗黄嘌呤方面有明显的优势，其它性能指标的评价也达到了市场同类产品的相同水平。为后续将此重组尿酸酶作为诊断用工具酶进行体外诊断制剂的申报工作提供了详细的实验室数据，也为将此重组尿酸酶药用制剂的开发奠定了基础。