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本实验研究中药对急性热应激小鼠肺脏组织结构的影响,钙离子的影响,CaM、HSF1、HSP70含量及其mRNA相对表达量的影响,初步探讨中药对急性热应激小鼠HSP70的基因调控机制,从分子水平上为进一步开发具有抗热应激的中药制剂提供理论依据。 选用6~7周龄体重相同健康SPF级昆明小白鼠70只,(购自南方医科大学实验动物中心),并将其随机分为复方一组、复方二组和复方三组、紫锥菊组、加多宝组、阳性空白对照组,阴性空白对照组,共7组。试验药物组分别灌胃中药复方一、中药复方二、中药复方三、紫锥菊、加多宝;对照组灌胃生理盐水,每只灌药0.4 mL,灌喂3d。而后药物组和阳性对照组小鼠试验期间放置于40℃恒温培养箱,实验时间分为1h、3h。阴性空白对照组置于25℃空调室内。在试验的第1h、3h时,每组随机取5只小白鼠,剖杀并采血。钙含量的测定按Ca试剂盒说明书进行测定,采用鼠CaMELISA检测试剂盒、HSF1 ELISA检测试剂盒、HSP70 ELISA检测试剂盒测定CaM、HSF1、HSP70含量,用RT-PCR法测定CaM mRNA、HSF1 mRNA、HSP70 mRNA的相对表达量。 试验结果显示如下: (1)在肺组织切片结果中,在阴性组中,肺泡边缘清晰,肺泡隔明显,而在阳性组中,热应激造成肺泡损伤严重,肺泡边缘模糊不可见,并且随着时间的延长,损伤愈加严重。而在用药组中,在应激1h时,各组肺泡边缘虽有所损伤,但肺泡结构清晰,在用药3h时,肺泡损伤已经不是很明显,并且与应激1h时相比,肺泡已有痊愈迹象。表明在各用药组中,中药复方发挥了抵抗热应激的作用,保护了机体肺组织。 (2)钙离子的检测结果显示中药能提高急性热应激小鼠血钙水平及肺、肾脏钙含量。其中中药复方三对血清钙浓度的升高作用最显著,且中药复方三组和紫锥菊组小鼠血清钙浓度极显著高于阳性对照组和阴性对照组,中药复方一能够较好的维持热应激小鼠肺脏和肾脏Ca2+浓度,应激1h时,中药复方二组小鼠肺脏钙含量最高,紫锥菊组小鼠肾脏钙含量最高,但3h时都有所下降,下降幅度均超过中药复方一组,这可能与山楂促吸收作用有关,山楂促使机体持续吸收钙,从而有效的维持钙水平。 (3)在应激1h时,阳性对照组的钙调素含量比其他各组都要高,在应激3h时,阳性对照组钙调素含量明显下降,而用药组下降较少,中药复方一和中药复方二还有所上升。而在肾组织中,随着时间的延长,各用药组钙调素含量均有所升高,而阳性对照组钙调素含量却下降。钙调素mRNA相对表达量的检测结果显示:随着应激时间的延长,肺钙调素mRNA的相对表达量有所下降,但用药组能缓解下降趋势,中药复方一和中药复方二甚至能增加其相对表达量;各应激组肾肺钙调素mRNA的相对表达量均有所上升。 (4)通过对肺组织中HSF1含量的研究发现,随着应激时间的延长,各用药组中热休克因子的含量都有所提高,其中中药复方二作用显著。肺组织中热休克因子mRNA相对表达量的变化与HSF1含量变化趋势大致相同。肾脏中HS目的含量是随着时间的延长而下降,与肺脏组织HSF1含量变化正好相反。 (5)中药对急性热应激小鼠HSP70的含量和HSP70mRNA相对表达量的变化趋势一致,中药复方一和中药复方二能显著提高HSP70的含量和HSP70mRNA相对表达量,与钙调素含量变化成正相关。本试验结果亦表明在3h时,肺脏HSP70有所下降,而肾脏的HSP70却上升。中药复方二对肺脏HSP70含量的增加作用最明显,而中药复方三对肾脏HSP70的作用最好。实验结果表明通过合理中药配伍能有效的增加急性热应激小鼠HSP70的含量或者能有效的缓解HSP70的下降趋势,以抵抗急性热应激对机体的损伤。