用于微生物除草剂的杂草病原真菌的筛选与评价

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本项研究的目的是为微生物除草剂的研究与开发提供更多的菌种资源。本文的研究内容及结果如下:杂草病原真菌的采集及分离研究。从浙江、上海、江苏、江西、马来西亚不同生态条件下的稻田采集自然感病杂草标样300余份,从感病标样中共分离到病原真菌336株。经形态学鉴定,确认所分离病原真菌主要分布于以下属:链格孢属Alternaria、弯孢属Curvularia、平脐蠕孢属Bipolaris、突脐蠕孢属Exserohilum、镰刀菌属Fusarium、茎点霉属Phoma、黑孔菌属Nigroporus。其中,链格孢属、弯孢属、平脐蠕孢属、突脐蠕孢属是优势菌属,占分离菌种的80%左右。具除草潜力病原真菌的筛选及鉴定研究。通过培养皿生测法从336株病原真菌筛选到34株菌株作为下一步温室盆栽生测试验的复筛菌株。通过盆栽生测法对34株潜力菌株复筛,发现有6株菌株对稗草叶片有较强的致病性,并且对稗草的株高和鲜重有较高的抑制率。提取6菌株DNA,对其rDNAITS序列做了测序和鉴定,试验结果显示:用ITS1和ITS4扩增的6菌株rDNA的ITS序列均为单一清晰条带,片段大小为600bp左右。根据序列测序结果,用Neibour-Joining法构建系统发育树。通过系统发育树,6株菌株与Bipolaris oryzae (Breda de Hann)和Cochliobolusmiyabeanus(Ito et Kuribayaski Drechsler ex Dastur)(稻平脐蠕孢菌有性态)的亲缘关系最近,相互聚为一簇,构成一个分支,bootstrap value为98%。结合菌落及孢子形态学特征和rDNAITS区域序列测定和分析结果,可以确定6株潜力菌株为稻平脐蠕孢菌。潜力菌株的杀草谱及对常见作物安全性测定研究。6株稻平脐蠕孢菌丝体悬浮液对目标杂草处理7d后,稗草、千金子、六蕊假稻、鸭舌草、矮慈姑、野荸荠均有不同程度的致病性,对双穗雀稗、异型莎草、看麦娘不致病。其中对禾本科稗草和千金子、雨久花科鸭舌草、泽泻科矮慈姑的致病力较强,对禾本科六蕊假稻、莎草科野荸荠有较弱的致病力。尤其是L5对稗草,以及L4、L5和L8对鸭舌草,它们的感病指数均大于60%,因此表现出较高的杀草活性。6株稻平脐蠕孢菌丝体悬浮液对主要农作物安全或致病性很弱,具有进一步开发为生物除草剂的潜力。潜力菌株的生物学特性研究。探索了温度、光照、pH、氧气、碳氮源对6株稻平脐蠕孢菌落生长的影响,确定了6株稻平脐蠕孢菌株固体平板培养菌丝生长的最佳培养条件,为以后潜力菌株的固体、液体发酵培养基扩大培养研究奠定基础。通过对不同培养时间发酵液毒素的HPLC分析,确定6株稻平脐蠕孢发酵液毒素的主要成分为蛇孢毒素A(ophiobolin A),同时确定了各个菌株在常规PDB发酵产毒的最佳时间,为以后各个菌株的杀草机理研究和液体发酵产毒研究奠定基础。
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