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研究背景和目的宫颈癌是女性生殖系统中最常见的恶性肿瘤。而放疗是宫颈癌的治疗手段之一,80%患者需接受放疗,而30-50%的晚期患者出现了放疗抵抗。因此,提高放疗敏感性对晚期宫颈癌患者而言十分重要。如今对宫颈癌的研究发现一些癌基因、转录因子等与宫颈癌的放疗敏感性密切相关,但仍缺乏公认的分子标志物。因此,寻找相关分子并研究其调控机制,对改善宫颈癌放疗敏感具有重要的意义。转录调控因子Sp1是一个具有序列特异性的DNA结合蛋白,参与调控了一些肿瘤的放疗敏感性,且其与宫颈癌的进展密切相关。因此,Sp1可能是影响宫颈癌放疗敏感的一个重要因子。本研究发现放疗可上调宫颈癌细胞中Sp1的表达,通过沉默/过表达SiHa、HeLa中Sp1的表达,揭示了 Sp1通过上调CDK1的表达减少放疗相关的G2/M期阻滞从而下调宫颈癌的放疗敏感性。本研究将分四部分进行。第一章Sp1与宫颈癌放疗的相关性研究目的研究Sp1与宫颈癌放疗的相关性方法利用western blot和RT-PCR检测放疗后宫颈癌细胞中Sp1的变化。结果宫颈癌细胞中Sp1的表达水平随照射剂量的增加而增加。结论Sp1与宫颈癌放疗密切相关。第二章Sp1与宫颈癌细胞放疗敏感性的关系目的探讨Sp1对宫颈癌放疗敏感性的影响方法构建Sp1沉默/过表达的宫颈癌细胞株,利用克隆形成及CCK8实验检测Sp1对宫颈癌放疗敏感性的影响。结果沉默Sp1可显著上调宫颈癌的放疗敏感性,过表达Sp1则相反。结论Sp1可下调宫颈癌的放疗敏感性。第三章Sp1通过调控放疗相关的细胞周期阻滞影响宫颈癌细胞放疗敏感性目的研究Sp1对宫颈癌细胞周期的影响方法利用流式细胞术检测Sp1对宫颈癌放疗相关细胞周期阻滞的影响结果抑制Sp1的表达可显著上调宫颈癌的G2/M期阻滞(p<0.05),而过表达Sp1则显著减少宫颈癌的G2/M期阻滞(p<0.05)结论Sp1可通过下调放疗相关的G2/M期阻滞从而下调宫颈癌的放疗敏感性。第四章Sp1通过调控CDK1影响宫颈癌细胞的放疗敏感性目的研究Sp1影响宫颈癌放疗敏感性的分子机制。方法1.利用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹检测沉默/过表达Sp1后G2/M周期相关的基因变化2.利用恢复试验验证Sp1通过调控CDK1影响宫颈癌的放疗敏感性3.利用双荧光素酶实验验证Sp1是否作用于CDK1的启动子结果1.Sp1可上调CDK1的表达(P<0.05)2.下调CDK1的表达后,Sp1对宫颈癌放疗敏感性的下调作用减小(P<0.05)3.Sp1显著上调CDK1启动子的荧光活性(P<0.01)结论Sp1可通过上调CDK1的表达下调宫颈癌的放疗敏感性。全文总结1.Sp1与宫颈癌放疗敏感性密切相关,沉默/过表达Sp1可显著上调/下调宫颈癌的放疗敏感性2.Sp1通过减少辐射相关的G2/M期阻滞下调宫颈癌的放疗敏感性3.Sp1通过上调CDK1的表达下调宫颈癌的放疗敏感性本项目的创新之处1.验证了 Sp1对宫颈癌放疗敏感性的作用;2.揭示Sp1通过调控CDK1下调宫颈癌放疗敏感性的分子机制。