SRY是睾丸发育过程起着关键调节作用的基因之一,定位于Y染色体上。SRY是SOX家族的首个成员,与其它所有成员一样,有着一个共同特点,都含有一个极其保守DNA结合域-HMG。迄今为止,已发现SRY、SOX3、SOX8、SOX9、MIS、WT-1、SF-1、DAX-1等基因,它们参与了性别决定的重要过程。在本课题第二部分采用基因重组技术构建重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达GST-SRY融合蛋白并对其进行了纯化。实验中利用PCR技术将SRY基因进行扩增后,将其插入pGEX-6P-1的原核表达载体中,经双酶切与测序验证后,pGEX-6P-1/SRY转化到原核表达菌株E.coli Rosetta DE3,IPTG诱导表达GST-SRY融合蛋白,用GST标签纯化树脂对其进行纯化。本实验成功构建了融合表达载体pGEX-6P-1/SRY,并诱导和纯化GST-SRY融合蛋白,为后续进一步研究该蛋白的分子功能奠定基础。在我们前期实验研究中证实了SRY能调节WDR5基因表达,两者并协同上调转录因子SOX9的表达,随后我们构建WDR5过表达的LNCaP细胞株,在WDR5上调SOX9表达的过程中,发现SOX9启动子上组蛋白标记H3K4me2水平都显著上调。为了进一步验证WDR5对SOX9的作用,在本课题中第三部分,我们采用染色质免疫共沉淀(ChIP)对另一个活跃基因标记修饰H3K9ac和基因沉默相关的H3K9me3以及H3K27me3研究SOX9启动子的修饰变化,进一步证实WDR5在SOX9调控过程中的表观机制。