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目的:此课题通过建立MDA-MB-435雌性无胸腺裸鼠模型,研究祖国医学中草药复方"小柴胡汤加减方”联合依西美坦对乳腺癌MDA-MB-435雌性无胸腺裸鼠瘤重的影响,研究祖国医学中草药复方"小柴胡汤加减方”联合依西美坦对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达的影响。材料与方法:(1)制备MDA-MB-435细胞悬液:取生长旺盛的HER-2/nue高表达的人乳腺癌MDA-MB-435细胞株,用胰蛋白酶进行消化后形成细胞悬液;(2)MDA-MB-435细胞裸鼠造模:MDA-MB-435细胞裸鼠造模:每只无胸腺的雌性卵巢切除裸鼠的右腋窝脂肪垫下接种细胞悬液0.2m L,形成HER-2/neu高表达的人乳腺癌裸鼠MDA-MB-453移植瘤,一共有4只裸鼠被接种,直至被接种的瘤长至1cm3时,在严格无菌条件下进行手术取材,然后将其移植瘤瘤块切成1mm3大小,无菌条件下在无胸腺的雌性卵巢切除的裸鼠的右腋窝脂肪垫下进行接种,建造裸鼠移植瘤模型,共40只无胸腺的雌性卵巢切除的裸鼠被接种,在种植后第4-5天即可见肿瘤生长,可以触及结节,100%成瘤,饲养15天后造模成功。(3)分组及给药;成功建造乳腺癌裸鼠模型后,将40只造模成功后的乳腺癌裸鼠平均分为4组,每组各10只。空白对照组:予对照组0.9%生理盐水0.4ml/只/d,灌胃频次:日一次;依西美坦组:0.3mg只/d,每灌胃频次:日一次;小柴胡汤加减方组:“小柴胡汤加减方”0.4ml/只/d灌胃,灌胃频次:日一次;小柴胡汤加减方+依西美坦组:依西美坦组:0.3mg只/d+“小柴胡汤加减方”0.4ml/只/d灌胃,灌胃频次:日一次;四组均连续给药21天。(4)处死取材:每组10只裸鼠均于末次给药后24小时(即造模成功后第16天)运用断颈法处死,处死后将腋下的肿瘤组织进行剥离,称出瘤体的重量并计算出抑瘤率,剥离组织存放好备用。采用Western blot法测定基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)相对含量。流程如图:结果:1.瘤重(单位g)及抑瘤率:空白对照组:1.032±0.870;依西美坦组:0.364±0.165;65.59%小柴胡汤加减方组:0.566±0.172;47.16%小柴胡汤加减方+依西美坦组:0.270±0.103;74.74%2.MMP-2及E-cadherin蛋白表达的影响:(1)MMP-2的灰度值表达:6529.232±128.926,4232.837±72.004,5245.171±100.890,2815.578±267.589。(2)E-cadherin的灰度值表达:2288.170±150.101,4929.361±187.661,3131.750±169.352,6371.439±125.152。结论:1.小柴胡汤加减方及依西美坦对乳腺癌MDA-MB-435细胞有抑制作用;并有协同作用。2.小柴胡汤加减方联合依西美坦可以调节MMP-2及E-cadherin蛋白表达的水平。