基因Girdin对结直肠癌肝转移的预测作用

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目的:结直肠癌是世界上第3大癌症,在发达国家中比较常见。肿瘤的转移是一个复杂并且连续的生物学现象,是恶性肿瘤的最主要生物学特征,是造成恶性肿瘤病人死亡的主要原因。很多结直肠癌首次诊断是都已经处于进展期,并且伴随肝转移,腹腔转移,和远处淋巴结转移或是其他脏器转移。尽管很多原因在结直肠癌进展,转移中起作用,但具体的机制却远没明确。现今的研究很少有能预测术后远期转移中起作用。基因Girdin是近年来新发现的一种与多种恶性肿瘤如乳腺癌,肺癌,宫颈癌等进展及转移相关的基因,但是在结直肠癌患者中的研究还是很少报道。本研究旨在检测Girdin在结直肠癌组织中的表达,检测Girdin是否为结直肠癌肝转移相关基因,和结直肠癌临床病理特点及预后之间的关系。因此,本研究结果对结直肠癌肝转移的早期筛查有重大意义,为结直肠癌患者早期发现转移病灶,及时制定合理的治疗策略奠定基础。方法:本研究我们选择在2001年1月至2005年12月期间435例病人,病人组织病理已证明是结直肠癌,并且进行了根治手术。并且,在2010年1月至2011年8月,选择12例病人进行PCR基因芯片分析。病人入组标准为:a进行根治性手术;b切除的组织进行病理检查;c术后至少10个淋巴结进行病理检查;d有完整的医学记录。我们采用免疫组化的方法半定量检测Girdin蛋白的表达,判定标准如下:按照下述方法对Girdin蛋白表达水平进行半定量分级:即每张切片随机选取20个视野,放大400倍,计算阳性细胞数量占视野中总细胞数量的百分比,将等级分为3级:阳性率<1%视为0级;阳性率在1%-10%视为1级;>10%视为2级。我们采用Western blot方法检测并比较Girdin基因在人结直肠癌组织的表达,并分别比较有和无肝转移组Giridn基因的表达。通过特殊定制的RT2ProfilerTMPCR芯片在结直肠癌组织中筛选结直肠癌肝转移相关基因。所有的数据使用SPSS软件分析,病人临床资料及病理学资料使用x2检验和Fisher检验或是独立T检验。肿瘤生存率使用K-M分析。生存率的差别分析用log-rank检验。在逐步回归中,使用Cox比例危险率模型进行多变量分析。结果:基因Girdin表达的蛋白是一个与结直肠癌肝转移相关的蛋白。免疫组化检测表明Girdin蛋白表达位于结直肠癌细胞浆内。与肿瘤邻近组织相比较,肿瘤组织表达的Girdin蛋白量显著增高(37.01vs10.57%, p=0.001)。而且,本研究发现Girdin蛋白在结直肠癌组织的表达与结直肠癌组织学的分级和远处转移相关,Girdin表达阳性患者占组织学分级中高分化比率为21.57%,中分化为35.66%,低分化46.03%;Girdin表达阳性在肝转移组占53.70%,无肝转移组占34.65%,2组P值均为0.007,表明G i r d i n表达与组织学分级,及有无肝转移相关,并有显著意义。然而,Girdin蛋白的表达与年龄,性别,和侵润深度无关。(P值分别为0.370,0.441,和0.958)。在所有54例有术后转移的患者中,32例发展为肝转移,其中87.5%有阳性的Girdin蛋白表达(p=0.001),有统计学意义。在435例中,161例Girdin表达阳性,并且Girdin的表达与组织学分期和肝转移相关。在12例结肠癌组织进行PCR芯片的检测中,发现Girdin,AKT,CD44,CDH1,VEGF,PNN,IGF1,E-CAD,TIMP4等基因上调,在结直肠癌组织中表达具有显著差异。通过Western blot方法,比较有和无肝转移组Girdin蛋白的表达,结果显示,伴有肝转移组,蛋白表达浓度明显高于无肝转移组。生存率分析表明在435病例中,Girdin表达,Duke’s分期,与组织学分级与结直肠癌存活率相关(P=0.01,0.001,0.001,log-ranktest)。在进行COX回归分析后,组织学分级,Duke’s分期,化疗,和Girdin分别是独立的预后因素。结论:目前的研究发现基因Girdin在结直肠癌组织高度表达,基因Girdin是与结直肠癌肝转移相关基因。Girdin的表达与组织学分级,Duke’s分期,Girdin与结直肠癌肝转移相关,与年龄,性别,侵润深度无关。组织学分级,Duke’s分期,化疗,和Girdin分别是结直肠癌肝转移独立的预后因素。因此,Girdin可能是一个潜在的结直肠癌肝转移的分子标志物。
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