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目的利用pre-let-7d转染人卵巢癌细胞,体外研究治疗卵巢癌的新方法及其调控hK10基因表达的作用。方法利用let-7d前体构建pre-let-7d质粒载体,通过质粒扩增、提取,将质粒转染人卵巢癌SKOV3和HO8910细胞。实验分组：空白对照组,不加质粒,仅用转染试剂；实验组,转染pre-let-7d;阴性对照组,随机序列转染。荧光显微镜观察和流式细胞术荧光细胞计数计算转染率。MTT、SRB和细胞计数检测pre-let-7d抑制卵巢癌细胞增殖作用。Annexin V-PE和PI标记流式细胞术和Hoechst33258染色检测细胞凋亡诱导作用。RT-PCR、ELISA检测pre-let-7d调控卵巢癌细胞中hK10mRNA及hK10蛋白的表达水平。结果以3μg质粒/孔转染人卵巢SKOV3和HO8910细胞24h、48h、72h后检测,转染率均在60%左右,达到实验要求。转染后MTT、SRB检测癌细胞的增殖抑制率随转染时间的延长而增高,存在时间依赖性。细胞计数绘制细胞生长曲线,转染后72h细胞增殖抑制率可达80%,达到高峰,以后随转染时间延长抑制率不再增加。Annexin V-PE/PI标记流式细胞术检测,pre-let-7d转染后24、48、72小时卵巢癌细胞凋亡率分别可达68.54%、75.58%、81.26%。Hoechst33258染色检测转染后24、48、72小时凋亡率分别可达49%、55%、61%。RT-PCR检测,转染pre-let-7d,使hK10mRNA表达水平降低,但ELISA法检测hK10蛋白水平无明显降低。结论1.转染pre-let-7d,能抑制卵巢癌细胞的增殖。2.转染pre-let-7d,能明显诱导卵巢癌细胞凋亡。3.转染pre-let-7d,可降低卵巢癌细胞中hK10mRNA表达,hK10蛋白水平无明显降低。microRNA let-7d可作为设计新治疗方法的靶点,通过下调hK10,用于治疗卵巢癌。