【摘 要】
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14-3-3蛋白是一类含量丰富的高度保守的酸性蛋白质,存在于真核生物细胞中.14-3-3蛋白是Moored等在分离牛脑蛋白的过程中发现的,后来陆续在许多真核生物中发现。14-3-3蛋白参
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14-3-3蛋白是一类含量丰富的高度保守的酸性蛋白质,存在于真核生物细胞中.14-3-3蛋白是Moored等在分离牛脑蛋白的过程中发现的,后来陆续在许多真核生物中发现。14-3-3蛋白参与细胞的许多生命活动,在细胞中具有重要功能,主要在信号转导、细胞周期、细胞凋亡、酶活性调节等过程中具有重要功能。 柞蚕是一种野生绢丝昆虫,属于鳞翅目、大蚕蛾科、柞蚕属。除了作为纺织工业原料外,还有很高的药用和食用等经济价值。本研究利用分子生物学和生物信息学方法对柞蚕14-3-3蛋白进行研究,获得的主要结果如下: 1、采用RT-PCR和RACE-PCR方法克隆获得了该蛋白的全长序列,14-3-3蛋白全长1220bp,ORF为744bp,编码247个氨基酸,分子量大小为28.1KDa和等电点为4.9。 2、采用RT-PCR法扩增了柞蚕14-3-3蛋白的ORF,并连接至PET-28a(+)表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,用IPTG进行了不同浓度的诱导表达,经SDS-PAGE电泳和Westernblot检测,被诱导的目的蛋白均得到了稳定的表达,进一步利用亲和柱层析纯化该重组蛋白,这为以后对14-3-3蛋白的真核表达及其功能的研究提供了参考。
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