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肺癌在现代社会中的患病率和死亡率越来越高,已成为危害人类健康的头号杀手,逐年增加的发病率和病死率越来越引起医务工作者甚至广大社会人群的重视。关于肺癌发病机制及新兴治疗方案的研究越来越深入,人们逐渐认识到肿瘤的发生发展与机体凋亡机制障碍密切相关。全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能有效抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞分化、凋亡,在抗肿瘤方面具有独到优势。关于ATRA诱导肺癌细胞凋亡的具体机制已有研究,但仍缺乏统一的观点,现在已公认bcl-2及P53基因在凋亡过程中发挥扮演着不可替代的重要角色,关于二者对凋亡过程的影响机制已基本明晰。目前,中晚期肺癌患者仍以化疗为主,铂类联合其他化疗药物仍是晚期非小细胞肺癌标准一线化疗方案,但铂类所致不良反应较多,除具有较严重的胃肠道反应、肾毒性、耳毒性、中枢神经系统损伤等不良反应外,还可造成DNA损伤修复基因表达异常、凋亡抑制因子表达异常、凋亡信号传导异常等,限制了其应用。本实验拟通过ATRA联合顺铂(cisplatin,DDP)作用于人肺腺癌A549细胞株,探讨其对肺癌细胞增殖、凋亡的影响,同时检测不同药物干预后A549细胞bcl-2及野生型P53基因的表达情况,以探讨VTRA促进细胞凋亡的机制,同时验证ATRA联合顺铂是否能提高后者的化疗作用,从而促进ATRA临床推广应用。目的：通过体外研究探讨ATRA联合DDP对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法：1.常规培养肺癌A549细胞,将生长状态良好的对数期肺癌细胞分为ATRA组、DDP组、ATRA+DDP组及对照组四组,采用四甲基偶氮唑法(Mosmann Tetrozolium Test,MTT)法分别检测作用于细胞24h、48h、72h后的吸光度值,计算在各时间段各实验组药物对细胞的生长抑制率。2.利用流式细胞仪检测不同药物干预后A549细胞的凋亡比率。3.应用免疫细胞化学方法检测ATRA组、DDP组、ATRA+DDP组及对照组bcl-2及野生型P53基因的表达情况。结果：1.通过MTT实验可观察到,药物干预细胞生长24h、48h、72h时,与对照组比较,ATRA组、顺铂组及两药联合组的吸光度值均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)；在ATRA组及联合组,细胞生长24h、48h、72h不同时间点生长抑制率的差异有统计学意义(P<0.05)；而在DDP组,细胞生长不同时间点抑制率的差异无统计学意义(P>0.05)。2. Annexin V/PI双染法流式细胞术检测显示,分别作用24小时、48小时及72小时,ATRA、DDP、ATRA+DDP组细胞的凋亡率明显高于对照组,ATRA组细胞的凋亡率高于DDP组；随着作用时间的延长,除对照组外,各组细胞的凋亡率均增加。3.免疫组化检测Bcl-2及P53基因表达情况,与对照组相比,ATRA组、DDP组及联合组bcl-2表达降低,密度及深度均减弱,差异有统计学意义(P<0.01)；与对照组及DDP组比较,ATRA、ATRA联合DDP作用于肺癌A549细胞后,P53表达增高,差异有统计学意义(P<0.01)；与ATRA组相比,联合组P53表达进一步增高,差异有统计学意义(P<0.05)。把bcl-2与P53基因表达结果进行Pearson相关分析,绘制两者含量的散点图,结果显示相关系数r=-0.438,P<0.05。提示两者表达呈负相关。结论：1. ATRA对肺癌A549的增殖具有抑制作用,ATRA能促进肺癌细胞凋亡,且具有时间依赖性；与DDP联合应用可增加后者对肺癌A549细胞的抑制率及凋亡率,降低其应用剂量；2. ATRA和／或DDP联用,能促进P53基因表达,抑制bcl-2基因表达,P53基因与Bcl-2基因可相互作用,两者表达呈负相关。