目的：　　帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是仅次于老年痴呆症的第二大神经退行性疾病，近年来发病率呈上升趋势。据报道NADPH氧化酶抑制剂胡黄连素二聚体可通过改善氧化应激来防止PD多巴胺能神经元的变性死亡，有望用作PD治疗的先导化合物进一步修饰获得更优的候选化合物。本研究通过MPP+诱导SH-SY5Y细胞建立体外帕金森细胞模型，筛选本课题组合成的胡黄连素衍生物在该模型中的保护作用，并选择药效较优者进行进一步的活性以及机制研究，为开发安全有效的抗帕金森病的新药奠定工作基础。　　方法：　　1、利用MPP+诱导SH-SY5Y细胞建立体外PD细胞模型，通过溴化四唑蓝（3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide，MTT）比色法检测细胞的存活率，采用酶标仪通过DCFH-DA法以及JC-1法分别检测细胞内ROS产生量与线粒体膜电位的变化，对本课题组所合成的35个胡黄连素衍生物进行初步活性筛选。　　2、在上述体外PD细胞模型中，对筛选出来具有较优药效的炔丙基半胱氨酸胡黄连素二聚体衍生物JJA-D10，进行其抗氧化、抗凋亡以及抗炎等药效活性研究。采用MTT法检测化合物的细胞保护作用；采用流式细胞仪通过DCFH-DA法以及JC-1法分别检测细胞内ROS产生量与线粒体膜电位的变化。采用试剂盒测定细胞内超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）的活性与脂质过氧化产物丙二醛（Malondialdehyde，MDA）的水平。通过Western Blot实验检测Bcl-2与Bax蛋白、Caspase-3与Cleaved caspase-3蛋白、以及TNF-α表达量的变化。　　3、通过对NADPH氧化酶、细胞信号通路以及PD特征标志物α-synuclein蛋白水平的研究，探讨JJA-D10保护PD细胞模型的作用机制。在上述体外PD细胞模型中，通过Western Blot实验检测JJA-D10处理后细胞内NADPH氧化酶的gp91-phox与p47-phox亚基蛋白量变化，以及PI3K-Akt、NF-κB、MAPKs、Nrf2/HO-1等信号通路的相关蛋白表达情况。通过荧光定量PCR检测NADPH氧化酶的gp91-phox与p47-phox亚基mRNA的变化。在细胞中分别加入PI3K-Akt信号通路抑制剂（LY294002、AKT inhibitor IV）与MAPKs信号通路抑制剂（SB202190、SP600125、PD98059），通过MTT实验检测JJA-D10对细胞存活率的作用，并通过Western Blot实验检测相关蛋白的表达情况，来进一步探讨JJA-D10对这些信号通路的作用。在过表达PD特征标志物α-synuclein蛋白的野生型SH-SY5Y细胞中，采用Western Blot实验检测JJA-D10对α-synuclein蛋白表达情况的影响。　　结果：　　1、采用50μM-1500μM的胡黄连素对SH-SY5Y细胞分别处理24h-72h，未出现细胞毒性。先导化合物JJA-D0在400μM时分别处理24h、36h、48h与72h，在200μM处理48h与72h，以及在100μM处理72h时，均显示出一定的细胞毒性作用，说明随着时间与剂量的增加，JJA-D0的毒性随之提高。通过MPP+诱导SH-SY5Y细胞造成帕金森细胞模型，当MPP+为1mM处理24h时，细胞存活率为空白对照组的50%，确定此条件构建体外帕金森细胞模型用于后续研究。对本课题组所合成的35个胡黄连素衍生物活性初筛的结果显示，所有化合物在剂量50-200μM下，于MPP+造模前预处理4h，无论是从提高细胞的存活率、减少细胞内ROS产生还是逆转线粒体膜电位的降低等方面，都显示了对PD细胞的保护作用，且大多数活性优于母体化合物胡黄连素。在所有化合物中，炔丙基半胱氨酸胡黄连素二聚体衍生物JJA-D10的活性优于其它化合物。　　2、在进一步的活性研究中，MTT实验结果表明，在200μM下，JJA-D10可显著改善MPP+所致的SH-SY5Y细胞损伤，细胞存活率为71%，显著高于模型组（P<0.001）。模型组ROS的产生量是正常细胞对照组的2.37倍，JJA-D10组则是其1.35倍。JJA-D10可增强细胞内总SOD酶的活力，降低细胞内MDA的水平。模型组细胞线粒体膜电位下降为正常细胞对照组的6.4倍，JJA-D10组则降低为其3.89倍。JJA-D10还可降低Bax蛋白和Cleaved caspase-3蛋白的表达，提高Bcl-2蛋白的表达。同时，JJA-D10可降低细胞内炎症因子TNF-α的表达。　　3、在200μM下，JJA-D10可下调NADPH氧化酶gp91-phox与p47-phox亚基的mRNA与亚基蛋白的表达量。Nrf2/HO-1通路激活具有抗氧化保护细胞的作用，JJA-D10可增加了Nrf2/HO-1通路中Nrf2与HO-1的蛋白表达而激活该信号通路。激活MAPKs信号通路与NADPH氧化酶和NF-κB激活有关，JJA-D10可降低p-ERK1/2、p-P38与p-JNK蛋白表达，从而抑制MAPKs信号通路。PI3K-Akt信号通路激活可产生抗氧化与抗凋亡作用，JJA-D10提高了PI3K-Akt信号通路中p-PI3K与p-Akt蛋白的表达，进而可激活该通路。激活NF-κB信号通路会导致下游的炎症因子TNF-α的表达增加，JJA-D10还能降低NF-κB信号通路中p-P65与p-IK K蛋白的表达，增加p-IκB的表达，从而抑制该通路起到抗炎作用。同时，在PD细胞模型中，分别加入PI3K-Akt与MAPKs信号通路的抑制剂LY294002(5μM)、Akt inhibitor IV(10μM)、SB202190(5μM)、SP600125(15μM)、PD98059(10μM)处理后，MTT实验结果显示PI3K-Akt信号通路抑制剂可阻断JJA-D10对体外PD细胞模型所产生的保护作用，JJA-D10具有MAPKs信号通路抑制剂相同的对体外PD细胞模型的保护作用。在Western Blot实验中，这些结果也得到了相应的验证。在过表达α-synuclein蛋白的野生型SH-SY5Y细胞中，JJA-D10能够降低PD特征标志物α-synuclein蛋白的表达，起到保护神经细胞的作用，进一步证实JJA-D10在体外PD细胞模型上的保护活性。　　结论：　　1、本课题组前期合成的大多数胡黄连素衍生物对MPP+诱导的SH-SY5Y体外PD细胞模型具有保护作用，其中JJA-D10的活性优于其它化合物。　　2、JJA-D10通过对NADPH氧化酶的抑制作用，降低PD特征标志物α-synuclein蛋白的表达，以及参与PI3K-Akt、Nrf2/HO-1、NF-κB和MAPKs等信号通路的调控，以抗氧化、抗凋亡与抗炎等机制对体外PD细胞模型产生保护作用。