目的：肺动脉高压是肺纤维化的常见并发症。本室以往的研究已发现，在气管内滴注BLM14天，模型大鼠出现肺动脉高压，但其形成机制，目前尚不清楚。肺动脉壁胶原沉积是肺动脉高压维持发展的一个关键环节。结缔组织生长因子是直接促进胶原纤维沉积的细胞因子。罗格列酮是过氧化物酶体增殖活化受体γ的激动剂，本室以往研究发现，RSG具有缓解BLM诱导的肺动脉高压的作用，但其作用机制，尚不清楚。本研究通过整体和离体实验观察气管内滴注BLM后第14天，大鼠肺动脉壁平滑肌层Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量的变化、肺动脉壁内皮层和平滑肌层CTGF的表达以及RSG对上述变化的影响，以阐明肺纤维化初期肺动脉高压形成及RSG抗肺动脉高压的作用机制，并为寻找其治疗靶点及药物提供实验资料。　　 第一部分博莱霉素诱导肺纤维化初期肺动脉壁CTGF的表达　　 方法：采用天狼星红染色法，观察气管内滴注BLM14天，大鼠肺动脉主干及肺内动脉壁Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的变化；并用免疫组织化学染色，观察大鼠肺动脉主干及肺内动脉壁CTGF表达及其分布的变化。　　 健康清洁级Sprague-Dawley雄性大鼠12只，随机分为两组：①Control组：一次性气管内滴入生理盐水；②BLM组：一次性气管内滴入BLM。　　 两组大鼠分别于造模后第14天取材。经颈动脉放血处死动物，用4％多聚甲醛溶液固定肺动脉主干及部分左肺组织。固定后的组织经脱水、透明、石蜡包埋后切片，用于天狼星红染色和免疫组织化学染色。JEDA-801D形态学图像分析系统分别计算肺动脉壁Ⅰ、Ⅲ型胶原天狼星红染色的阳性面积百分比、CTGF免疫组织化学染色阳性的平均光密度值及阳性面积百分比。所有数据均用均数±标准差表示，采用SPSS13.0统计软件，两样本均数比较采用t检验，以P<0.05为有显著性差异。　　 结果：1.滴注BLM大鼠肺动脉主干Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的变化滴注BLM大鼠肺动脉主干血管壁Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维染色面积与Control组相比均明显增多；Ⅰ、Ⅲ型胶原染色面积比值与Control组相比增大；Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维的增多突出表现为平滑肌层，尤其Ⅰ型胶原纤维增多更为明显。　　 2.滴注BLM大鼠肺内动脉壁Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的变化滴注BLM大鼠肺内动脉壁Ⅰ、Ⅲ型胶原染色面积与Control组相比均明显增多；但BLM大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原染色面积比值与Control组相比，其差异却无统计学意义。　　 3.滴注BLM后大鼠肺动脉主干CTGF含量的变化滴注BLM大鼠肺动脉主干CTGF免疫阳性表达与Control组相比明显增多，而BLM组增多主要在平滑肌层。　　 4.滴注 BLM后大鼠肺内动脉壁CTGF含量的变化滴注BLM大鼠肺内动脉壁内皮和平滑肌细胞CTGF的免疫阳性表达与Control组大鼠相比也明显增多。　　 小结：气管内滴入BLM14天，大鼠肺动脉壁平滑肌层Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的含量明显增多；肺动脉壁平滑肌层和内皮层CTGF的表达也明显增加。这可能是BLM致肺纤维化初期肺动脉高压维持和发展的重要机制之一。　　 第二部分罗格列酮对博莱霉素诱导肺纤维化初期肺动脉壁CTGF表达的影响　　 方法：采用与第一部分相同的方法，观察RSG对肺动脉壁Ⅰ、Ⅲ型胶原和CTGF表达变化的影响。　　 健康清洁级Sprague-Dawley雄性大鼠36只，随机分为四组：①NS+NS组：一次性气管内滴入生理盐水，NS灌胃14天；②BLM+NS组：一次性气管内滴入BLM，NS灌胃14天；③BLM+RSG组：一次性气管内滴入BLM，RSG灌胃14天；④NS+RSG组：一次性气管内滴入生理盐水，RSG（灌胃14天。　　 四组大鼠分别于造模后第14天取材。其中，BLM+NS组有6只大鼠肺动脉取出后立即被置于4％多聚甲醛中固定，另外12只大鼠的肺动脉在体外孵育（DMEM培养液，37℃，5％CO2）24小时后被置于4％多聚甲醛溶液中固定。体外孵育分两组：分别为单纯培养液组（DMEM）和RSG孵育组（DMEM中含RSG10μmmol/L），每组6只大鼠。所有数据均用均数±标准差（x±s）表达，采用SPSS13.0统计软件，整体给药数据用单因素方差分析，多个样本均数间的两两比较用最小显著差法（LSD），离体给药数据采用两样本均数比较t检验，以P<0.05为有显著性差异。　　 结果：1、RSG对滴注BLM后大鼠肺动脉主干Ⅰ、Ⅲ型胶原含量变化的影响NS+NS组大鼠肺动脉主干平滑肌层有少量Ⅰ、Ⅲ型胶原。NS+NS组，NS+RSG组，大鼠肺动脉壁平滑肌层Ⅰ、Ⅲ型胶原染色面积及Ⅰ、Ⅲ型胶原染色面积比值分别为（2.35±0.46，0.33±0.02，7.12±0.92）；（2.42±0.37，0.35±0.02，7.29±0.92）。两组相比，其差异均无统计学意义（P>0.05）。BLM+NS组肺动脉壁Ⅰ、Ⅲ型胶原染色面积及Ⅰ、Ⅲ型胶原染色面积比值分别为（4.56±0.63，0.51±0.07，9.21±0.89）均明显多于NS+NS组（P<0.05）。BLM+RSG组肺动脉壁Ⅰ、Ⅲ型胶原染色面积及Ⅰ、Ⅲ型胶原染色面积比值分别为（2.33±0.49，0.34±0.02，6.78±1.07），与BLM+NS组相比均明显减少（P<0.05）。离体水平RSG孵育组（DMEM中含RSG10μmmol/L）肺动脉壁Ⅰ、Ⅲ型胶原染色面积（7.39±0.51，2.32±0.26）与单纯DMEM孵育组（7.74±1.83，2.08±0.37）相比，其差异均无统计学意义（P>0.05）。　　 2、RSG对滴注BLM后大鼠肺内动脉壁Ⅰ、Ⅲ型胶原含量变化的影响NS+NS组大鼠肺内动脉壁平滑肌层有少量Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维；NS+RSG组肺动脉壁Ⅰ、Ⅲ型胶原染色面积分别为（1.99±0.14，1.06±0.12），与NS+NS组（1.86±0.52，1.05±0.14）相比，其差异均无统计学意义（P>0.05）。BLM+NS组肺动脉壁Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维染色面积分别为（4.58±0.67，2.23±0.25），与NS+NS组相比均显著增多（P<0.01）。BLM+RSG组肺动脉壁Ⅰ、Ⅲ型胶原染色面积分别为（1.85±0.16，0.99±0.12），与BLM+NS组相比均明显减少（P<0.01）。NS+NS组、BLM+NS组、BLM+RSG组、NS+RSG组肺内动脉壁Ⅰ、Ⅲ型胶原染色面积比值分别为（2.03±0.51）、（2.32±0.68）、（2.06±0.15）和（1.98±0.07），BLM+NS组与其他三组比较偏高些，但四者相比无统计学意义（P>0.05）。　　 3、RSG对滴注BLM14天后大鼠肺动脉主干CTGF含量变化的影响NS+NS组大鼠肺动脉壁各层均有少量CTGF免疫阳性表达的细胞。NS+RSG组大鼠肺动脉壁内皮细胞、平滑肌细胞CTGF免疫阳性表达（平均光密度0.33±0.01，阳性面积1.26±0.39）与NS+NS组（平均光密度0.32±0.03，阳性面积1.38±0.43）相比，其差异无统计学意义（P>0.05）。而BLM+NS组（平均光密度0.41±0.02，阳性面积8.79±1.17）明显强于NS+NS组（P<0.05）。BLM+RSG组（平均光密度0.33±0.04，阳性面积1.23±0.52）明显弱于BLM+NS组（P<0.05），但与NS+NS组、NS+RSG组相比大鼠肺动脉壁内皮细胞、平滑肌细胞CTGF的表达变化不明显（P>0.05）。离体水平RSG孵育组（DMEM中含 RSG10μmmol/L）肺动脉壁CTGF免疫阳性表达（平均光密度0.30±0.01，阳性面积1.78±0.26）弱于单纯DMEM孵育组（平均光密度0.36±0.02，阳性面积5.16±1.14）（P<0.05）。　　 4、RSG对滴注BLM后大鼠肺内动脉壁CTGF含量变化的影响NS+NS组肺内动脉壁有少量CTGF的表达（平均光密度0.30±0.02，阳性面积1.08±0.32）。与NS+NS组相比，NS+RSG组大鼠肺内动脉壁平滑肌细胞CTGF的表达无明显变化（平均光密度0.29±0.02，阳性面积0.99±0.21）（P>0.05）；BLM+NS组（平均光密度0.42±0.05，阳性面积12.1±1.87）明显强于NS+NS组（P<0.05）。BLM+RSG组（平均光密度0.28±0.01，阳性面积1.05±0.34）明显弱于BLM+NS组（P<0.05），但与NS+NS组、NS+RSG组相比，其差异均无统计学意义（P>0.05）。　　 小结：整体给药，RSG可降低BLM诱导的肺纤维化初期肺动脉壁平滑肌层Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的含量，并抑制肺动脉壁平滑肌层和内皮层CTGF的表达；离体给药，RSG对肺动脉壁平滑肌层Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的含量的影响不明显，但可抑制肺动脉壁平滑肌层和内皮层CTGF的表达。这可能是RSG降低肺动脉高压的机制之一。　　 结论：1、气管内滴入BLM14天，大鼠肺动脉壁平滑肌层Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的含量明显增多，肺动脉壁平滑肌层和内皮层CTGF的表达也明显增加，这可能是BLM致肺纤维化初期肺动脉高压维持和发展的重要机制之一。　　 2、整体给药，RSG可降低BLM诱导的肺纤维化初期肺动脉壁平滑肌层Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的含量，并抑制肺动脉壁平滑肌层和内皮层CTGF的表达；离体给药，RSG对肺动脉壁平滑肌层Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的含量的影响不明显，但可抑制肺动脉壁平滑肌层和内皮层CTGF的表达。这可能是RSG降低肺动脉高压的机制之一。