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背景大量研究表明,血压变异性增高是很多心脑血管疾病发生和进展的高危因素,可作为一项独立于血压之外反映心血管功能的指标。且不只是在高血压人群中,即使在血压值正常的人群中,血压变异性都是普遍存在的,然而,这往往被医生、患者所忽视,最终为人类的健康带来极其不利的影响。但目前,导致血压变异性增高的具体分子机制尚不清楚,因此,阐明血压变异性增高的机制具有重要意义。离子通道TRPC6(transient receptor potential cation channel 6)与很多心血管疾病的发生与进展有关。我们的前期实验表明,当血压变异性增加时,去窦弓神经(Sino-aortic denervation,SAD)大鼠模型主动脉平滑肌细胞中TRPC6的蛋白表达增加。因此我们推测TRPC6可能参与了对血压变异的调控。本实验的目的在于阐明TRPC6及TRPC6-Ca N-NFAT通路在SAD大鼠血压变异性中的调控作用。方法本实验的目的在于阐明TRPC6在大鼠血压变异性中的调控作用。我们通过对SD大鼠实施SAD手术,成功构建大鼠血压变异性增高的模型,该模型具有血压变异性增高而平均血压水平不增高的特点。血压变异性的表示方法为,每白天12个小时中,使用大鼠尾无创动脉血压检测仪,每隔1小时检测大鼠尾部无创血压,每次测得1个血压数值,最后根据12小时的血压数据进行计算,将收缩压及舒张压的标准差表示为大鼠的血压变异性。首先为10周龄SD大鼠实施SAD手术,SAD手术后8周进行血压测量,采用Western Blot、免疫荧光和定量RT-q PCR技术检测大鼠心肌和胸主动脉组织中TRPC6的表达水平,为了排除TRPC3对血压变异性的影响,TRPC3(transient receptor potential cation channel 3)在该组织中的表达水平同时被检测。为了进一步探讨TRPC6与SAD大鼠血压变异性增高的关系,我们在该实验中设计了不同浓度的TRPC6的激动剂及阻断剂,将从低到高3种不同浓度的TRPC6激动剂和阻断剂给予大鼠腹腔注射,以期从正反两方面探索TRPC6对血压变异性的调控作用。在此基础上,本研究进一步探讨了TRPC6-Ca N-NFAT分子通路在BPV升高中的作用。给予SAD大鼠腹腔注射TRPC6激动剂GSK1702934A(2mg/kg)或TRPC6阻断剂SAR7334(10mg/kg)后,取出心肌和胸主动脉组织,采用Western Blot检测NFAT在心肌组织和胸主动脉组织中的表达量,使用Ca N活性检测试剂盒检测组织中Ca N活性。研究结果结果显示:1.SAD术后,大鼠的收缩压变异性及舒张压变异性明显增加,但大鼠收缩压、舒张压水平及心率水平无明显变化,且SAD术后,大鼠胸主动脉和心肌组织中TRPC6的m RNA及蛋白表达水平与假手术组相比明显增高,但TRPC3的m RNA及蛋白表达水平无明显变化。2.腹腔注射不同剂量的TRPC6激动剂GSK1702934A后,SAD大鼠收缩压及舒张压变异性明显增高,且血压变异性的增高程度与激动剂的用量呈剂量依赖性,激动剂的用量越大,血压变异性增高越明显。3.腹腔注射不同剂量的TRPC6阻断剂SAR7334后,SAD大鼠收缩压及舒张压变异性明显降低,且血压变异性降低的程度与阻断剂的用量呈剂量依赖性,阻断剂用量越大,血压变异性降低越明显。4.SAD大鼠心肌组织内Ca N活性和NFAT表达量显著增高,而TRPC6活性被促进或抑制后,Ca N活性和NFAT表达量相应地进一步增加或显著降低。结论SAD大鼠心肌及胸动脉组织中TRPC6的表达明显增加,但TRPC3的表达无明显变化,提示TRPC6可能参与了血压变异性的调控,且TRPC6可能通过Ca N-NFAT通路在SAD大鼠BPV增高中发挥重要作用。并且,该研究提示TRPC6-Ca N-NFAT通路在SAD大鼠血压变异性增加中可能起到作用,表明干预TRPC6-Ca N-NFAT通路可能是防治血压变异的重要临床药理作用靶点,为进一步优化降压治疗及预防靶器官损害提供理论研究的依据。