海参的自溶问题严重制约了海参养殖、加工产业的发展,所以海参的自溶问题不容忽视。当海参受到外界理化等因素刺激会发生自身溶解,课题组前期研究发现在海参自溶的过程中存在细胞凋亡的现象,因此,从细胞凋亡角度研究海参自溶过程,对解释海参自身溶解的本质有重要的意义。本文采用免疫组织化学法对经紫外线照射诱导的海参自溶过程中体壁部位的细胞色素C迁移现象进行了原位标记观察。采用免疫印迹试验检测了海参肠细胞质和线粒体中细胞色素C的分布情况,海参体腔液细胞质中细胞色素C和caspase-9的存在情况。采用TUNEL方法检测了海参自溶过程中体壁细胞发生凋亡的情况。结果表明,通过免疫组织化学法标记出海参体壁细胞色素C,比较不同自溶时间的海参体壁免疫染色图片发现:新鲜海参体壁的细胞色素C染色颗粒较大,随着自溶时间的增加,染色颗粒逐渐变小并且向周围扩撒。通过免疫印迹试验分离并标记出海参肠细胞质、线粒体中的细胞色素C,海参肠细胞质中的细胞色素C的分子量约为15KDa,随着自溶时间的增加细胞质中细胞色素C含量逐渐增加,线粒体中含量逐渐减少。标记出海参体腔液细胞质中细胞色素C、caspase-9。采用TUNEL法检测自溶过程海参体壁凋亡细胞,自溶0.5小时海参体壁细胞核DNA开始出现断裂,随着自溶时间的增加,出现DNA断裂的细胞核逐渐增多,证明海参自溶过程存在细胞凋亡现象和线粒体凋亡途径。