固定化酶可有效提升酶的催化效率、稳定性和重复使用等性能,因此新型高效的酶固定化载体是酶工程领域持续研究的重要课题。本论文以开发新型高效酶固定化载体为目标,提出利用带有疏水侧链的两性离子聚合物涂覆多孔疏水性微球,用于脂肪酶的固定化,以提高脂肪酶的活性和稳定性。首先利用悬浮聚合法合成了聚(乙酸乙烯酯-二乙烯基苯)多孔疏水微球(MS),并将带有十八烷烃侧链的两性离子聚合物,聚(马来酸酐-十八碳烯)和二甲基乙二胺的派生物p(MAO-DMEA)吸附在微球孔表面,制备了表面涂覆p(MAO-DMEA)的聚合物涂覆微球(p-MS)。扫描电镜、能谱分析、热重分析、元素分析等表征结果表明,MS与p-MS制备成功,且两性离子聚合物与MS之间疏水吸附作用力较强,不易脱落。氮气吸附实验测得MS孔径为21.9 nm,p-MS孔径随两性离子聚合物涂覆量的增大而减小。当涂覆密度达到13.0%时,孔径降低到17.1 nm。其次,利用MS和p-MS为载体,通过疏水吸附固定化脂肪酶(CRL)。利用涂覆密度为8.9%的微球p2-MS固定化脂肪酶得到p2-MS-CRL,酶载量达到27.6 mg/g干载体,固定化脂肪酶牢固地吸附于载体,不易脱落。由于涂覆聚合物疏水性侧链对固定化脂肪酶具有界面活化作用,固定化脂肪酶活性达到游离酶的1.5倍,并且酶和底物的亲和性亦高于游离酶(酶反应动力学的米氏常数仅为游离酶的1/2)。固定化酶的热稳定性、p H稳定性和贮藏稳定性均较游离酶具有明显的提高,重复使用8次,酶活可保持50%。利用此固定化脂肪酶催化扁桃酸甲酯水解反应的结果表明,p2-MS-CRL的催化活性约为游离酶的2倍,说明其在扁桃酸的制备中有一定开发应用前景。因此,含疏水侧链两性离子聚合物涂覆疏水多孔微球是一种具有进一步开发价值的固定化酶载体。