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门静脉结扎或栓塞已广泛应用于肝脏肿瘤病人的治疗，尤其是对已失去手术切除治疗时机的晚期肝癌病人，在临床上已取得较好的疗效，同时为二期手术切除赢得机会。门静脉结扎或栓塞可以导致缺血侧的萎缩及对侧的代偿性增生，从而维持肝脏的结构和功能，但其具体发生机制尚不清楚。已证实，核因子-кB (nuclear factor kappaB, NF-кB)及其所调控的一些细胞因子，如肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α) 和白细胞介素-6 (interleukin-6, IL-6) 等，在细胞的增殖与凋亡中具有重要作用，为了解其是否在部分门静脉血流阻断后肝脏的增殖与凋亡中起作用，我们用大鼠进行实验，观察70%门静脉分支高位结扎 (portal branch ligation, PBL) 后肝脏组织中NF-кB活性变化和细胞因子TNF-α与IL-6表达的变化，及其与肝细胞增殖与凋亡的关系，以探讨其在门静脉分支高位结扎后肝脏增殖与凋亡中的作用。第一部分目的 观察70%门静脉分支高位结扎后大鼠肝脏结构和功能的变化。方法 Wistar大鼠60只，随机分成假手术对照组和门静脉结扎组。动物分别于术后0.5、1、2、3、7和14d处死，测定血清转氨酶水平，观察术后肝脏大体结构的改变，光学显微镜下观察肝脏显微结构的改变，透射电子显微镜下观察结扎侧肝脏超微结构的改变。结果 70%门静脉分支高位结扎后，结扎侧肝叶呈进行性萎缩变小，对侧则成比例的代偿性增生肥大。在整个观察期间，全肝的总重量维持恒定，肝脏功能基本保持正常。光镜下见结扎侧肝脏仅在术后早期出现少量的点、片状坏<WP=9>死，未结扎侧肝脏出现明显的增殖改变。电子显微镜显示结扎侧肝脏早期出现典型的凋亡改变，晚期明显纤维化。结论 70%门静脉分支高位结扎后，结扎侧肝叶呈进行性萎缩变小，对侧则成比例的代偿性增生肥大，全肝的总重量和肝脏功能保持正常。 第二部分目的 观察70%门静脉分支高位结扎后大鼠肝脏增殖与凋亡的改变。 方法 Wistar大鼠60只，随机分成假手术对照组和门静脉结扎组。动物分别于术后0.5、1、2、3、7和14d处死，用TUNEL法对结扎侧肝细胞凋亡进行定量分析，光学显微镜下观察未结扎侧肝细胞的增殖情况并作定量分析，DNA电泳和透射电子显微镜下进行形态学观察对肝细胞凋亡作定性分析。结果 70%门静脉分支高位结扎后，结扎侧肝叶呈进行性萎缩变小，对侧则成比例的代偿性增生肥大。TUNEL显示结扎侧肝细胞在术后凋亡明显增加，于第2天达高峰，同时对侧肝细胞却明显增殖。DNA电泳显示典型的梯形条带，电子显微镜显示结扎侧肝脏早期出现典型的凋亡改变，晚期明显纤维化。结论 近70%门静脉分支高位结扎后，结扎侧由于肝细胞大量凋亡呈进行性萎缩变小，对侧肝细胞则以有丝分裂的方式成比例的代偿性增生肥大。 第三部分目的 探讨NF-кB在70%门静脉分支高位结扎后大鼠肝脏增殖与凋亡中的意义。方法 Wistar大鼠60只，随机分成假手术对照组和门静脉结扎组，动物分别于术后0.5、1、2、3、7和14d处死。分离纯化肝细胞，提取核蛋白，运用凝胶迁移变动分析 (EMSA) 检测术后肝脏NF-кB的活性。结果 70%门静脉分支高位结扎后，肝脏组织中NF-кB的活性明显升高，于第2d达高峰，1w后基本恢复正常，与肝细胞增殖与凋亡改变相一致。结扎侧肝组织NF-кB活性的升高较对侧更为明显。结论 70%门静脉分支高位结扎后，肝脏组织中NF-кB的活性明显升高，其可能在肝脏的增殖与凋亡中具有重要意义。<WP=10>第四部分目的 探讨TNF-α在70%门静脉分支高位结扎后大鼠肝脏增殖与凋亡中的作用。方法 Wistar大鼠50只，随机分成假手术对照组和门静脉结扎组，动物分别于术后0.5、1、2、3、7和14d处死。用TriPure RNA 提取液提取肝脏组织的RNA，用RT-PCR检测大鼠肝脏组织TNF-αmRNA水平，用ELISA检测大鼠肝脏组织TNF-α的蛋白水平。结果 70%门静脉分支高位结扎后，肝脏组织TNF-αmRNA水平和蛋白水平明显升高，于第2d达高峰，1w后基本恢复正常，与肝细胞增殖与凋亡改变相一致。结扎侧肝组织TNF-α的改变较对侧更为明显。结论 70%门静脉分支高位结扎后，肝脏组织中TNF-α在转录和翻译水平的表达均明显上升，其可能在肝脏增殖与凋亡中具有重要作用。第五部分目的 探讨IL-6在70%门静脉分支高位结扎后大鼠肝脏增殖与凋亡中的作用。方法 Wistar大鼠50只，随机分成假手术对照组和门静脉结扎组，动物分别于术后0.5、1、2、3、7和14d处死。用TriPure RNA 提取液提取肝脏组织的RNA，用RT-PCR检测大鼠肝脏组织IL-6 mRNA水平，用ELISA检测大鼠肝脏组织IL-6的蛋白水平。结果 70%门静脉分支高位结扎后，未结扎侧肝脏组织IL-6mRNA水平和蛋白水平明显升高，于第2-3d达高峰，1w后基本恢复正常，与肝细胞增殖改变相一致。结扎侧肝组织IL-6水平无明显变化。结论 70%门静脉分支高位结扎后，未结扎侧肝脏组织中IL-6在转录和翻译水平的表达均明显上升，其可能在该侧肝细胞增殖过程中具有重要作用。总结1．70%门静脉分支高位结扎后，大鼠结扎侧肝脏由于肝细胞的大量凋亡呈进行性萎缩变小，未结扎侧则以有丝分裂的方式成比例的代偿性增生肥大，全肝的?