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目的:本研究基于痛风发作特点和中医方剂药性配伍理论,拟利用现代药理学、分子生物学和代谢组学技术探究桂皮醛与虎杖苷温清配伍和清温配伍干预高尿酸血症的药效作用及其相关作用机制,探讨桂皮醛与虎杖苷温清配伍于夜间给药是否能更好地干预高尿酸血症以期预防痛风的夜间发作。方法:120只SPF级雄性昆明小鼠按照体重随机分为正常小鼠(10只)和造模小鼠(110只),置于时间生物学实验室固定光照(L)∶黑暗(D)时间(L:D=12:12,暗期为08:00-20:00,明期为20:00-08:00)。造模小鼠每天上午9点灌胃200mg/kg氧嗪酸钾和200mg/kg次黄嘌呤制备高尿酸血症小鼠模型,造模7天(1次/d),正常小鼠灌胃等量0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)。第7天灌胃完2 h后,眼眶取血检测小鼠血尿酸(SUA)水平。将造模成功的90只小鼠分为模型组、非布司他组、苯溴马隆组、桂皮醛与虎杖苷温清配伍低剂量组(WQ-L组)、温清配伍中剂量组(WQ-M组)、温清配伍高剂量组(WQ-H组)、虎杖苷与桂皮醛清温配伍组(清温组)、虎杖苷组和桂皮醛组,每组10只。各给药组在灌胃造模药1h后灌胃相应治疗药,正常组和模型组灌胃等量0.5%CMC-Na,给药28天(1次/d)。给药第27天放进代谢笼收集24 h尿液。第28天给药1h后,摘眼球取血后处死小鼠,取肝脏和肾脏备用。试剂盒法测定小鼠血清中SUA、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平,以及腺苷脱氨酶(ADA)、谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性,尿液中尿尿酸(UUA)和尿肌酐(UCr)水平,肝脏中黄嘌呤氧化酶(XOD)活性;制作小鼠肾脏病理切片观察肾脏损伤情况;q PCR法检测肾脏尿酸盐阴离子转运体1(URAT1)、果糖转运蛋白9(GLUT9)和有机阴离子转运蛋白1(OAT1)以及肝脏ADA、生物钟循环输出蛋白(CLOCK)与大脑和肌肉ARNT样蛋白1(BMAL1)m RNA的表达水平;Western blotting法检测肾脏URAT1、GLUT9和OAT1以及肝脏ADA、XOD、CLOCK和BMAL1的蛋白表达水平;核磁共振氢谱(1H-NMR)法建立高尿酸血症小鼠血清和尿液的代谢指纹谱图;正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)法比较各组小鼠代谢物谱图差异;结合变量重要性投影(VIP)与t检验筛选血清和尿液中具有显著差异的与高尿酸血症相关的潜在生物标志物,并比较各组含量变化。结果:与正常组比较,给药前各组小鼠SUA水平显著上升(P<0.01);给药后与模型组比较,各给药组SUA水平显著降低(P<0.01,P<0.05);WQ-H组的SCr水平显著降低(P<0.05);除WQ-L组外,其余各给药组的BUN水平和XOD活性显著降低(P<0.01,P<0.05),UUA和UCr水平均显著上升(P<0.01,P<0.05);除WQ-L组和虎杖苷组外,其余各给药组ADA活性均显著降低(P<0.01,P<0.05);各给药组GPT和GOT活性均无显著性差异。观察肾脏病理切片发现,温清配伍组和清温组均能改善高尿酸血症小鼠的肾脏损伤。与模型组比较,各给药组均能显著降低肾脏URAT1、GLUT9和肝脏ADA m RNA与蛋白及XOD蛋白的表达(P<0.01,P<0.05),显著升高肾脏OAT1、肝脏BMAL1 m RNA和蛋白及CLOCK m RNA的表达(P<0.01,P<0.05);WQ-H组能显著降低肝脏CLOCK蛋白的表达(P<0.05)。WQ-H组可分别使血清和尿液中7个和3个与高尿酸血症相关的潜在生物标志物产生明显地回调(P<0.01,P<0.05),清温组可分别使血清和尿液中5个和3个与高尿酸血症相关的潜在生物标志物产生明显地回调(P<0.01,P<0.05)。结论:桂皮醛与虎杖苷的单体组和配伍组均具有明确的抗高尿酸血症作用,温清配伍组的降尿酸效果优于清温组、虎杖苷组和桂皮醛组,其作用机制与抑制小鼠肝脏XOD、ADA活性,调控肾脏转运体和肠道微生态代谢、嘌呤代谢、氨基酸代谢、脂质代谢和糖代谢有关。此外,还可能通过调控肝脏时钟基因干预高尿酸血症。