抗辐射菌lexA基因及其表达蛋白质生物学功能的研究

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抗辐射菌是一种对电离辐射、紫外线及其他DNA损伤剂都具有显著抗性的微球菌.该菌能在辐照后几小时内准确无误地修复每条染色体上至少150多个DNA双链断裂.已有的研究表明该独特的抗性归功于其高效准确的DNA损伤修复能力.然而,对其修复路径及其机制知之甚少.抗辐射菌中是否存在SOS修复路径,及在大肠杆菌等菌中广泛存在的LexA蛋白在抗辐射菌中的功能特性如何均是未解之谜.该研究利用已构建的抗辐射菌lexA基因突变体菌株XE,经受不同剂量γ射线照射和不同时间的MMC作用,平板菌落计数,绘制存活曲线.对lexA基因突变体XE的研究表明,其辐射抗性与lexA基因野生型的抗辐射菌KD8301相近,存活曲线上均显示有一个宽大的肩区,结果发现lexA基因的突变并没有改变抗辐射菌的独特抗性,说明lexA基因与辐射抗性无关.应用电穿孔技术将携带有抗辐射菌lexA基因的重组质粒PZA172转入大肠杆菌JM109,其启动子为lacZ,用IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳检测LexA蛋白的表达.经受不同剂量γ射线照射和不同浓度的MMC作用,平板菌落计数,绘制存活曲线.抗辐射菌lexA基因在大肠杆菌细胞中,经IPTG诱导能稳定地表达,lexA基因的显著表达降低了大肠杆菌经γ射线照射和MMC作用后的存活率.抗辐射菌lexA基因在大肠杆菌中的显著表达降低了大肠杆菌对γ射线和MMC的抗性,其作用机理还有待于进一步的研究.该研究采用了DNA解旋荧光法检测由γ射线所致的DNA链断裂的损伤程度以及抗辐射菌LexA蛋白的辐射防护作用,在辐照前加入不同浓度的LexA蛋白,检测DNA链的断裂,结果表明DNA链的断裂程度随着γ射线辐照剂量的增加而增强,抗辐射菌LexA蛋白对γ射线所致DNA链断裂的修复不起作用,进一步说明抗辐射菌LexA蛋白不起辐射防护作用.
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