生长激素可控表达转基因猪的制备

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lilunyi
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生长激素(growth hormone, GH)是由垂体分泌的一种促进动物机体生长、肌肉发育、调节代谢等重要生理功能的多肽激素。本研究报告主要介绍本人在站期间开展的关于转GH基因猪的工作进展。首先,对猪GH基因进行改造,构建含不同内含子的生长激素基因过表达载体(pTTGH),在细胞内进行表达活性验证,发现含部分内含子的GH基因表达活性显著提高;以含第1,2内含子的生长激素基因构建诱导型GH表达载体及整合型GH诱导表达真核细胞载体,利用PCR、实时荧光定量PCR (QRT-PCR)及western等研究方法在细胞水平验证调控效率、强力霉素(Deoxycycline, DOX)诱导后目的基因表达的时间;整合型诱导表达载体转染猪胎儿成纤维细胞,经G418筛选后,筛选出整合有外源基因并具有GH诱导表达活性的细胞系,在细胞水平检测外源基因的整合位点、拷贝数、外源基因的表达及诱导活性,利用徒手克隆法制备转基因猪,采集来自克隆仔猪耳尖成纤维细胞在细胞水平进行表达检测;研究结果表明成功制备出了可控表达GH转基因猪。本文主要结论:1.证明了GH内含子对GH基因表达有促进作用;2.成功构建整合型可控表达GH载体;3.成功制备可控表达生长激素转基因猪并获得一批F1代仔猪;4.转基因猪及后代繁殖力及健康状况正常,并且都具有较好的诱导活性;
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