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目的:
研究CD147siRNA转染对寻常型银屑病患者外周血T细胞增殖、活化和细胞外基质黏附能力的影响。旨在进一步明确CD147分子在银屑病发病中的作用机制,探讨将CD147作为靶分子,运用siRNA技术对银屑病进行基因治疗的可行性。
方法:
1、收集门诊确诊为寻常型银屑病患者10例,抽取外周血20 mL,密度梯度离心法分离外周血单一核细胞(PBMC);通过葡萄球菌肠毒素B(SEB)和人重组白细胞介素2(rIL-2)共同培养5天后采用流式细胞仪检测T细胞纯度为(92.88±1.81)%:
2、将化学合成的CD147siRNA电转染至T细胞中,采用半定量RT-PCR法检测转染后96小时内转染细胞中CD147 mRNA表达水平的变化;
3、采用MTT法检测转染CD147siRNA 24、48和72 h后T细胞增殖水平的变化:
4、运用流式细胞仪法检测转染CD147siRNA 24、48和72 h后对T细胞活化标记分子CD25表达的影响;
5、采用基质黏附实验检测转染CD147siRNA 24、48和72 h后对T细胞胞外基质黏附能力的影响。
结果:
1.转染CD147siRNA 1 24、48和72 h后,T细胞中CD147 mRNA表达水平均降低(P均<0.05),以转染后48小时下降最为显著(P<0.001),干扰效率为(62.87±5.5)%;而转染后96 h恢复至接近转染前水平(P>0.05);转染CDl47siRNA 2 48小时后,CD147mRNA表达水平降低,干扰效率为(10.2±3.1)%(P<0.05),其余时间点无显著下降(P>0.05):
2.转染CD147siRNA 1 24 h、48 h和72 h后,T细胞的增殖能力显著降低(P均<0.001),其抑制率分别为(44.5±3.13)%、(50.7±3.5)%、(53.98±4.15)%:
3.转染CD147siRNA 1 24 h、48 h和72 h后,T细胞表面CD25分子的表达水平由(80.2±4.8)%、(81.6±3.35)%、(83.5±4.1)%下降到(47.23±3.65)%、(31.5±4.22)%、(23.05±4.1 5)%(P均<0.001):
4.转染CD147siRNA 1 24 h、48 h和72 h后,T细胞的胞外基质黏附能力显著降低(P值分别<0.01、<0.001、<0.001),下降率分别为(29.8±4.66)%、(43.53±3.88)%、(56.5±4.13)%。
结论:
1.建立了针对人外周血T细胞进行siRNA瞬时转染的实验方法;
2.CD147分子与银屑病患者外周血T细胞的增殖、活化和基质黏附能力相关,可能是一种新的银屑病治疗靶分子。