CD147siRNA转染对银屑病患者外周血T细胞增殖、活化及基质黏附能力的影响

来源 :中南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:EricQLiu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的: 研究CD147siRNA转染对寻常型银屑病患者外周血T细胞增殖、活化和细胞外基质黏附能力的影响。旨在进一步明确CD147分子在银屑病发病中的作用机制,探讨将CD147作为靶分子,运用siRNA技术对银屑病进行基因治疗的可行性。 方法: 1、收集门诊确诊为寻常型银屑病患者10例,抽取外周血20 mL,密度梯度离心法分离外周血单一核细胞(PBMC);通过葡萄球菌肠毒素B(SEB)和人重组白细胞介素2(rIL-2)共同培养5天后采用流式细胞仪检测T细胞纯度为(92.88±1.81)%: 2、将化学合成的CD147siRNA电转染至T细胞中,采用半定量RT-PCR法检测转染后96小时内转染细胞中CD147 mRNA表达水平的变化; 3、采用MTT法检测转染CD147siRNA 24、48和72 h后T细胞增殖水平的变化: 4、运用流式细胞仪法检测转染CD147siRNA 24、48和72 h后对T细胞活化标记分子CD25表达的影响; 5、采用基质黏附实验检测转染CD147siRNA 24、48和72 h后对T细胞胞外基质黏附能力的影响。 结果: 1.转染CD147siRNA 1 24、48和72 h后,T细胞中CD147 mRNA表达水平均降低(P均<0.05),以转染后48小时下降最为显著(P<0.001),干扰效率为(62.87±5.5)%;而转染后96 h恢复至接近转染前水平(P>0.05);转染CDl47siRNA 2 48小时后,CD147mRNA表达水平降低,干扰效率为(10.2±3.1)%(P<0.05),其余时间点无显著下降(P>0.05): 2.转染CD147siRNA 1 24 h、48 h和72 h后,T细胞的增殖能力显著降低(P均<0.001),其抑制率分别为(44.5±3.13)%、(50.7±3.5)%、(53.98±4.15)%: 3.转染CD147siRNA 1 24 h、48 h和72 h后,T细胞表面CD25分子的表达水平由(80.2±4.8)%、(81.6±3.35)%、(83.5±4.1)%下降到(47.23±3.65)%、(31.5±4.22)%、(23.05±4.1 5)%(P均<0.001): 4.转染CD147siRNA 1 24 h、48 h和72 h后,T细胞的胞外基质黏附能力显著降低(P值分别<0.01、<0.001、<0.001),下降率分别为(29.8±4.66)%、(43.53±3.88)%、(56.5±4.13)%。 结论: 1.建立了针对人外周血T细胞进行siRNA瞬时转染的实验方法; 2.CD147分子与银屑病患者外周血T细胞的增殖、活化和基质黏附能力相关,可能是一种新的银屑病治疗靶分子。
其他文献
目的:研究NK-1受体在外周及脊髓痛信号传递过程中对脊髓p38MAPK活化的影响,并探讨其痛觉调制机制。方法:本实验分为两部分,第一部分是外周实验。行为学观察:24只雄性Wistar大
目的:评价脂肪乳剂(Fat Emulsion,FE)治疗急性胰腺炎(Acute Pancreatitis,AP)的疗效和安全性。 方法:计算机检索Cochrane图书馆临床试验资料库(Ovid平台)、Medline(Ovid平台)
目的:研究槲皮素(Que)对培养的乳鼠心脏成纤维细胞的纤维连接蛋白(FN)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,探讨其在心肌肥厚中可能的作用机制。 方法:1.细胞分离培养和鉴定
投影机使用中,投影灯泡损坏是一种常见的故障,其原因主要是操作者不按要求的程序操作造成的。用继电器设计制作一个延时断点保护器,在关闭投影机后,自动强制性的延时断电,即