成人病毒性肺炎是威胁人类健康的重大疾病之一,具有病情重和较高病死率的特点,目前缺乏特效治疗手段。发挥传统中医防治病毒性肺炎的优势,并探讨其疗效机制,是提高病毒性肺炎的防治水平的重要途径之一。本研究在此背景下,进行了成人病毒性肺炎中医病机及瓜蒌甘草颗粒(GLGC)对其作用机制的研究,以期为提高中医药防治成人病毒性肺炎的水平提供一定的理论和实验依据。 本研究分为理论研究和实验研究。1 理论研究 在文献回顾及导师相关经验总结的基础上,提出成人病毒性肺炎属于中医风温肺热病和疫病的范畴;成人病毒性肺炎病机与痰、热、毒、虚、瘀等有关;正气不足是其发病的内伤基础;内生之毒续生是其重要的病理环节;痰热毒互结、肺气壅塞是其重要的病机特点;瘀血阻络是其后续病理表现;正邪对比是决定其预后转归的关键因素。进而提出病毒性肺炎的重要病理状态是痰热毒壅肺、正气不足,清热化痰,解毒益气是其重要治法之一。2 实验研究2.1 目的 药效学研究是为证实以清热化痰、解毒益气为法的瓜蒌甘草颗粒治疗流感病毒FM1所致病毒性肺炎的有效性而设;在此基础上,进一步从病理形态学、氧自由基损伤、免疫调节、免疫炎症相关因子的分泌情况来探讨瓜蒌甘草颗粒对流感病毒FM1感染所致的病毒性肺炎免疫炎症机制的作用。2.2 方法 药效学研究:以小鼠酚红排泄实验方法观察瓜蒌甘草颗粒的祛痰作用;以小鼠经鼻吸入流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM1)复制小鼠病毒性肺炎模型,并用瓜蒌甘草颗粒进行治疗,设置利巴韦林治疗对照组,观察其对流感病毒FM1感染小鼠的死亡保护作用、体重、肺指数及病毒血凝滴度的影响。 肺脏病理学研究:按照上法复制小鼠病毒性肺炎模型,用瓜蒌甘草颗粒进行治疗,观察其对流感病毒FM1感染小鼠病理改变的影响,设置利巴韦林治疗对照组。用肉眼、光镜和透射电镜对各组肺脏标本进行病理形态学观察,同时采用半定量分析方法比较各组病理形态学差异。 肺脏氧自由基损伤研究:小鼠病毒性肺炎模型复制方法同前,分别于第 1、3、5、7<WP=6>-4- 瓜蒌甘草颗粒对流感病毒 FM1所致肺炎的免疫炎症机制研究天动态观察瓜蒌甘草颗粒对流感病毒肺炎小鼠肺组织超氧化物歧化酶(SOD)及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量的影响,设置利巴韦林治疗对照组。 淋巴细胞增殖及 NK 细胞活性研究:用 MTT 比色法,观察瓜蒌甘草颗粒对感染小鼠淋巴细胞增殖及NK细胞活性的影响,设置利巴韦林治疗对照组;小鼠病毒性肺炎模型复制方法同前。 免疫炎症相关因子研究:用ELISA 法,于第1、3、5、7 天动态观察瓜蒌甘草颗粒对感染小鼠肺脏和外周血清中TNF-α、IL-6、MCP-1、IFN-γ和IL-10的影响。小鼠病毒性肺炎模型复制方法同前。2.3 结果 药效学研究结果显示,以清热化痰、解毒扶正为法的瓜蒌甘草颗粒能促进小鼠气道酚红的排泄;瓜蒌甘草颗粒治疗组较模型组死亡率明显降低,平均生存天数明显延长,体重下降得到明显改善,肺指数和血凝滴度都明显降低。 肺脏病理学研究结果显示,模型组肺脏大体病变呈实变,出血;光镜下观察病理组织学改变,呈重度间质性肺炎病变,可见支气管上皮脱落,肺泡间隔增厚,肺泡壁和细支气管壁大量单个核细胞浸润,形成实变区,肺泡腔内浆液性惨出,并形成代偿性肺水肿;电镜下观察各组肺脏超微结构,肺脏间质细胞增加,间质水肿,肺泡腔中可见大量坏死脱落细胞和少量红细胞,可见凋亡小体;肺泡壁有较多的间质细胞;血管壁基底膜增厚水肿,血管内充满红细胞(肺血管淤血),血管腔内可见单个核细胞嵌顿。瓜蒌甘草颗粒治疗组与模型组相比,无论是肺脏大体病变、病理组织学改变以及超微结构均有明显改善。 肺脏氧自由基损伤研究结果显示,模型组各时相肺组织中脂质过氧化产物 MDA 的含量均较假手术组显著升高,而抗氧自由基损伤的 SOD 含量较假手术组则均显著下降;瓜蒌甘草颗粒治疗组与模型组相比,MDA含量降低,其中第5、7天有显著差异;瓜蒌甘草颗粒治疗组与模型组相比,SOD含量则明显恢复,其中第5、7天有显著差异。 淋巴细胞增殖和NK活性研究结果显示:模型组小鼠脾T、B淋巴细胞增殖能力和NK细胞活性较假手术组均明显降低;瓜蒌甘草颗粒治疗组脾 T、B 淋巴细胞增殖能力和 NK细胞活性较模型组有明显恢复。 免疫炎症相关因子研究结果如下: 模型组肺组织匀浆液中TNF-α含量较假手术组升高,其中第1、3、5天增高有显著差异;GLGC治疗组肺组织匀浆液中TNF-α含量较模型组降低,其中第3天有显著差异。外周血清中模型组TNF-α含量较假手术组亦有升高,其中第3天有显著差异;GLGC治疗组血清TNF-α含量较模型组无明显改变。 肺组织匀浆液中模型组IL-6含量较假手术组升高,其中第3天有显著差异;GLGC治疗组肺组织匀浆液IL-6含量较模型组降低,其中第3天有显著差异。外周血清中模型组IL-6含量较假手术组亦有升高,其中第3天有显著差异;GLGC治疗组血清IL-6含量较模型组无明显改变。<WP=7>中文摘要 -5- 肺组织匀浆液中模型组各时相 MCP-1 含量较假手术组均显著升高,GLGC 治疗组肺组织匀浆液MCP-1含量较模型?