杀螟硫磷、吡虫啉免疫层析电化学检测方法的研究

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有机磷类杀虫剂杀螟硫磷的化学名称为0,0二甲基-O-(3-甲基-4-硝基苯基)硫代磷酸酯,具备触杀和胃毒作用,杀虫谱广,对鳞翅目的稻纵卷叶螟、水稻大螟、二化螟、三化螟等害虫的幼虫防效最佳,也可用于预防和控制鞘翅目、半翅目害虫。其机理是抑止乙酰胆碱酯酶的催化活性,使突触部位积聚大量的乙酰胆碱,乙酰胆碱不断地作用于突触后膜处的乙酰胆碱受体,使得突触后的神经纤维长期兴奋,同时阻碍突触部位的神经冲动传导,昆虫中毒后兴奋、痉挛,而后瘫痪、死亡。1-(6-氯吡啶-3-吡啶基甲基)-N-硝基亚咪唑烷-2-基胺,即吡虫啉,是超高效的氯化烟酰类杀虫剂,具触杀、胃毒和内吸等多重功能,对同翅目的飞虱、叶蝉、蚜虫和缨翅目的蓟马等害虫有极高活性。吡虫啉是氯化烟酰类当中首个以烟碱型乙酰胆碱受体为作用靶标的杀虫剂,速效性好,残效期长。杀螟硫磷和吡虫啉的不合理使用带来了农药残留问题,需要通过建立快速检测的方法以保证环境的安全和人类的健康。当前报道的农药检测方法主要有气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)。这些检测手段都是传统的分析检测技术,都可以灵敏地检测出农产品中残留的农药含量,然而它们都需要对样品进行较为繁冗的预处理,费时且成本高,另外还需要大型检测仪器,也需要专业操作人员和技术维护人员,不适用于现场检测。电化学检测技术和免疫层析试纸条则可以弥补上述技术的缺陷,能满足现场快速检测的要求。本研究首先创立了一种新颖的电化学检测杀螟硫磷的方法,具体如下:将玻碳电极用氧化石墨烯分散液加以修饰,室温晾干备用,通过时间-电流曲线富集120s后用方波伏安法扫描-0.2 V~-1.0 V电势范围(不可逆还原峰),而后相同方法富集240s,再扫描-0.6 V-0.3V电势范围(可逆氧化峰),通过氧化峰峰电流的大小来定量检测杀螟硫磷的含量。因富集了两步,所以称为两步法。此方法线性范围为1ng·ml-1~400 ng·mL-1,线性方程为 ipa(μA)= 0.133 c(ng.mL-1)+ 0.953(R2= 0.999),最低检测限可达0.1ng·mL-1(S/N=3)。另外,根据文献报道建立了一种方法,即富集后直接扫描可逆氧化峰,为了区分本研究创立的方法,称其为一步法,此方法线性范围为50 ng·mL-1~1600 ng·ml-1,线性方程为 ipa(μA)= 0.002 c(ng·ml-1)+ 0.037(R2 = 0.997),最低检测限为40ng·mL-1(S/N=3)。两种方法相比,本研究创立的方法检测信号更大,灵敏度更高。在此基础上研究了非竞争免疫层析试纸条以特异性捕获杀螟硫磷,具体如下:将一定量的杀螟硫磷抗体包被在试纸条上并烘干之后,配制一定浓度的杀螟硫磷标准品进行点样,待农药通过层析作用与抗体发生特异性结合之后,用洗液将表面未特异性结合的抗原物质洗去,而后将抗原抗体复合物用解离液进行解离,最后将农药用于电化学检测。该部分工作主要优化了适合组装该免疫层析试纸条的NC膜、非竞争免疫反应体系的反应液离子浓度和洗液浓度等参数。另外还探索了吡虫啉的电化学信号,优化了方庆奎博士建立的免疫层析试纸条检测吡啉方法中的一些参数,包括工作缓冲液的pH值和盐离子浓度等,以期为两种方法联用检测吡虫啉奠定基础。
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