【摘 要】
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乙型流感病毒（Influenza B virus,IBV）对非人哺乳动物宿主的致病性和决定毒力因素的研究至关重要,为了研究季节性流感病毒的发病机制并开发抗流感病毒药物,需要提供动物模型,而研究IBV的动物模型匮乏,限制了对乙型流感致病性和传播因素的研究,以及动物抗病毒药物及疫苗有效性的评估,所以本研究使用WHO推荐的2019年北半球的季节性乙型流感病毒疫苗毒株B/Colorado/06/2017-
【基金项目】
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国家病原微生物资源库项目和中国科学院青年创新促进会项目（2017122）；
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乙型流感病毒（Influenza B virus,IBV）对非人哺乳动物宿主的致病性和决定毒力因素的研究至关重要,为了研究季节性流感病毒的发病机制并开发抗流感病毒药物,需要提供动物模型,而研究IBV的动物模型匮乏,限制了对乙型流感致病性和传播因素的研究,以及动物抗病毒药物及疫苗有效性的评估,所以本研究使用WHO推荐的2019年北半球的季节性乙型流感病毒疫苗毒株B/Colorado/06/2017-like virus（B/Victoria lineage）,简称IBV-WT（wild type Influenza B virus strain,IBV-WT）毒株。使用IBV-WT毒株以103.83MLD50/50μL感染小鼠,5 dpi（Days post infection,Dpi）时剖杀小鼠取肺脏研磨上清感染下一代小鼠,通过在小鼠体内连续传代,在第20代获得小鼠适应性乙型流感病毒毒株（Mouse-adapted influenza B virus,IBV-MA）。分析季节性B型Victoria流感病毒适应非人哺乳动物后的遗传学表征,并比较IBV-WT与IBV-MA的致病力,确认MA毒株增加对小鼠的致病力并研究其适应小鼠后致病机制。同时为检测传代过程中病毒的复制情况,在传代实验过程中根据流感病毒NS2（Non-structural,NS2）蛋白设计复制型病毒检测引物及探针。结果显示MA代剖杀小鼠肺脏研磨上清感染小鼠,小鼠表现出严重的临床症状:蜷缩、被毛杂乱、行动迟缓,在6dpi时全部死亡。分析其适应小鼠过程中的遗传学表征,基因组分析显示:与WT相比,MA毒株有五个突变,分别是HA基因上的I188T、NA基因上的K358E以及PA基因上的S157G、V431I。IBV-WT与IBV-MA同时固定10~2TCID50/50μL感染小鼠,分别在3 dpi、5 dpi、7 dpi、9 dpi、14 dpi时间点剖杀小鼠。通过体重变化,肺脏病毒滴度,病理切片的比较发现:MA组比IBV-WT组体重下降更明显,小鼠靶器官内病毒滴度更高。同时成功建立季节性B性Victoria流感病毒基因组及复制型亚基因q RT-PCR检测方法。
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