【摘 要】
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固氮蓝藻是热带亚热带地区重要的微生物资源之一,作为促生菌具有固碳、固氮、溶磷和产生活性物质等作用,在农业生产中有作为生物肥料和生物农药应用的潜力。研究表明固氮蓝藻可以应用于一些作物病害的防治。但据我们查阅的国内外文献,其在水稻纹枯病防治方面的研究鲜见报道。本研究拟从华南地区的农田和湿地等地分离纯化固氮蓝藻,通过气候箱微室实验和水泥池微区实验筛选具有抗水稻纹枯病能力(人工接种高致病性立枯丝核菌菌株G
【基金项目】
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广东省科技计划项目(2015A020209152和2016A030303050); 中山市科技计划项目(2014A2FC239);
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固氮蓝藻是热带亚热带地区重要的微生物资源之一,作为促生菌具有固碳、固氮、溶磷和产生活性物质等作用,在农业生产中有作为生物肥料和生物农药应用的潜力。研究表明固氮蓝藻可以应用于一些作物病害的防治。但据我们查阅的国内外文献,其在水稻纹枯病防治方面的研究鲜见报道。本研究拟从华南地区的农田和湿地等地分离纯化固氮蓝藻,通过气候箱微室实验和水泥池微区实验筛选具有抗水稻纹枯病能力(人工接种高致病性立枯丝核菌菌株GD-118)的藻株,并研究其抗病机理,本论文的主要实验结果如下:(1)从实验室分离纯化的藻株中挑选长势较好的藻株进行了水稻-固氮蓝藻共养-纹枯病苗期接种微室初筛实验,结果发现藻株C、L和TS对水稻纹枯病的拮抗作用显著高于其他藻株,防治效应分别达到了 87.85%、85.08%和80.66%。而复筛实验发现,藻C和L处理的防治率分别为70.73%和68.42%,显著高于井冈霉素处理(48.48%),但3株藻之间差异不显著。同时,发现藻处理时藻丝可附着于水稻根部形成生物被膜。(2)微区控制实验:第一季:2018年早稻对微室实验筛选出的3种藻株进行微区控制实验,3种藻株在接菌后的30d内对水稻纹枯病的防治效应均接近30%,并且水稻产量显著高于不加藻的CK。同时藻处理对水稻植株的根长和地下部生物量有显著促进作用。同时,在水稻生长不同时期藻处理在一定程度上提高了土壤养分含量。第二季:2018年晚稻微区控制实验中,接种病原菌30d后,接种2株藻的防治效应虽然低于5%井冈霉水剂处理(69.01%),但C和TS处理分别达到了 42.96%和42.25%。通过两季实验结果综合分析,以TS的效果最好,C次之,同时晚稻效果比早稻好。(3)经过形态学和分子生物学分析(16S rRNA和rbcLX基因同源性分析)对筛选到的3株藻进行了鉴定:藻株C鉴定为Nostoc piscinale,而L和TS均与Anabaena variabilis ATCC 29413 有极高的同源性(>99%)。(4)双层平板藻-菌共培养实验结果发现3株藻的挥发物对立枯丝核菌无明显抑制作用。琼脂平板扩散实验结果表明藻细胞培养液的15倍浓缩液均对立枯丝核菌无明显抑制作用,而藻株C、L和TS的藻细胞乙酸乙酯提取液对立枯丝核菌有抑制作用,抑制率分别为90.12%、78.33%和89.87%。(5)用GC-MS对3株藻产生的潜在抗菌活性物质进行了分析,结果发现3株藻的藻细胞中十七烷含量均最高,藻株C、L和TS分别达到16.68%、11.8%和10.24%,其次是邻苯二甲酸二丁酯。而藻细胞分泌到培养液中的物质以十八酸含量最高。最终挑选10种物质通过琼脂平板扩散实验评估了其对立枯丝核菌GD-118的拮抗作用,结果发现己二酸二异辛酯、二十一烷、棕榈油酸、2,4-二叔丁基酚、邻苯二甲酸二丁酯、十七烷、十八烷酸和棕榈酸甲酯等8种物质具有拮抗作用,它们对立枯丝核菌的IC50分别为 0.213、0.249、0.374、0.417、0.426、0.572、0.609 和 0.623 g/L。(6)UPLC-MS-MS分析了藻细胞和培养液中的植物激素,结果发现3株藻均能产生水杨酸、生长素和细胞分裂素。藻C的水杨酸含量最高,达到3654.74 ng/g DW,藻TS次之(1078.77 ng/g DW)。藻细胞中含有的3种生长素中仅藻C的IB A达到687.99 ng/g DW,IAA和IPA含量很低。测到的4种细胞分裂素,藻C的TZR含量最高,达到 5269.67 ng/g DW,藻 TS 的 IP 次之,达到 2830.98 ng/g DW。综上所述,实验筛选到了 3株能防治高致病性立枯丝核菌GD-118导致的水稻纹枯病的固氮蓝藻,其抗病机理可能包括:(ⅰ)能够附着在水稻植株的根部形成生物膜,与水稻纹枯病菌进行生态位竞争,起到物理隔离作用;(ⅱ)产生己二酸二异辛酯和十七烷等活性物质产生直接拮抗作用;(ⅲ)产生植物激素调节水稻的生理过程,促进水稻植株的生长和提高抗逆性。(ⅳ)可能通过固氮、固碳和解磷等作用,增强了土壤肥力,促进水稻生长以提高其抗病性。
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