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猪繁殖与呼吸障碍综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)是一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状为特征的严重接触性传染病，它的致病病原是猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)，PRRSV有两个基本的血清型：欧洲型和北美型，其代表株分别被命名为Lelystad Virus和VR-2332。该病给世界养猪业所造成的经济损失巨大，但是目前对于该病的防治较为薄弱，因此，急需对病毒的复制，转录机制进行基础性研究，寻找基因治疗的靶位点。本实验室拥有北美型PRRSV感染性克隆(GenBank登陆号：AF184212sp)，在此基础上，我们可以对基因调控特定序列进行插入，缺失，替换等一系列的突变，以利于寻找调控病毒感染性以及正常生物合成的顺式调控因子(cis-acting element)，为人工获得减毒活疫苗创造条件。本研究中，主要对象是基因组的5’UTR，利用PRRSV感染性克隆这个反向遗传操作系统，进行了以下几方面的研究，现将研究内容简述如下： 1．PRRS病毒反向遗传操作对不同遗传型5’UTR的替代研究 在PRRSV北美株感染性克隆pCBC2的基础上，利用突变PCR(PCR-based mutagenesis)技术成功构建了在病毒基因组5’UTR和ORF1起始密码子之间插入Nde Ⅰ位点的全长克隆pTLNd4，并在此基础上将北美株病毒的5’UTR替换为欧洲株的5’UTR，成功构建了全长嵌合克隆pTLV8。将其体外转录成RNA并转染MARC-145细胞，pTLNd4产生了细胞病变(CPE)，pTLV8未产生CPE。对这两株突变感染性克隆进行RT-PCR以及Northern Blot试验，分别对病毒基因组的复制和亚基因组的转录进行了鉴定，同时还对产生病变的pTLNd4进行了病毒学常规试验，结果表明pTLNd4与野毒株无论是从分子生物学水平或是病毒学水平都无明显差异，而pTLV8虽未产生细胞病变，但是RT-PCR检测到了基因组的复制，说明这个突变病毒不能产生CPE，但是可以进行基因组的复制。 2．PRRSV 5’UTR末端序列缺失突变对病毒复制过程的影响