基质金属蛋白酶(matrix metaloproteinases,MMPs)及其组织抑制剂(tissue inhibitors of metalproteinases,TIMPs)是非常重要的降解酶体系,TIMP-1是这个体系中重要的抑制物。TIMP-1是基质金属蛋白酶抑制剂家族的主要成份,可以通过抑制MMPs的活性而阻断其对细胞外基质的降解作用,引起细胞外基质的积聚,在肿瘤的浸润、转移、预后和脏器纤维化过程中有重要的作用。在肾脏领域中,TIMP-1是最早也是最广泛被研究的TIMP家族成员,研究者们发现:肾小球系膜细胞、上皮细胞、近端肾小管上皮细胞、及肾间质成纤维细胞均表达TIMP-1,说明TIMP-1在肾脏是广泛存在的,并且研究证实TIMP-1的表达在多种肾小球疾病中变化显著。研究表明在肾脏纤维化的发生和发展过程中,基本都存在TIMP-1的过度表达,TIMP-1的过度表达可以引起ECM降解的减少,导致细胞外基质的积聚,在肾小球硬化和肾间质纤维化中有重要作用。建立转基因动物模型,对于揭示TIMP-1在慢性肾炎发病进程无疑是一个重要手段。 为此我们有关TIMP-1在前期研究基础上,应用显微注射法建立TIMP-1转基因小鼠动物模型。用PCR方法作为筛选方法,PCR确定为阳性的再进行Southern杂交鉴定,这样的方法组合,使得整合鉴定方法更加快速可靠。实验过程中,共注射1200只卵,注射后896只存活,存活率74.7%。将其中612只卵移植入21只假孕母鼠的输卵管中,其中10只小鼠受孕,共有32幼仔出生。存活28只。幼子出生率5.2%。转基因阳性鼠4只,出生鼠外源基因整合率12.5%。以四只首建鼠为种群,进行繁殖传代。将每只转基因首建鼠分别与正常小鼠交配产下子一代。待子代小鼠长至3周龄后,将小鼠分窝并剪尾,进行PCR检测。我们共获得F1子鼠100只,其中PCR阳性的17只,Southern阳性7只。