目的：构建携带PPARγ<,2>基因的腺病毒载体，为进一步研究PPARγ<,2>基因的功能，为阐明HBV感染导致肝癌的机制研究建立基础。 方法：本课题采用PCR技术从pcDNA3质粒中扩增小鼠PPARγ<,2>基因，将PPARγ<,2>基因亚克隆至质粒穿梭载体pAdTrack-CMV中，同时与pAdEasy-1共转染293细胞，确定转染率，并转化到肝脏L02细胞表达。 第一部分：以小鼠PPARγ<,2>基因质粒(PPARγ<,2>-pcDNA3)为材料，通过PCR方法扩增小鼠PPARγ<,2>基因，获得目的基因PPARγ<,2>，分别用Sal Ⅰ和Xho Ⅰ酶切PPARγ<,2>基因片段和pAdTrack-CMV，用T4DNA Ligase(连接酶)连接，将PPARγ<,2>基因片段亚克隆到pAdTrack-PPARγ<,2>-CMV中，构建腺病毒(adenovirus)穿梭质粒载体。正确重组的pAd-track-PPARγ<,2>，用PmeⅠ线性化后与pAd Easy-1在BJ5183中同源重组，酶切得到一条23 kb左右的大片段和一条约4.5kb的特征性小片段，表明重组腺病毒质粒构建成功。 结果：经PCR扩增的PPARγ<,2>片段克隆到腺病毒载体中，获得目的基因的测序结果与GENEBANK报道的序列一致(pubmed RID：1144300157-17643-133739705 380BLASTQ1)。正确重组的pAd-track-PPARγ<,2>用PmeI线性化后与pAd Easy-1在B55183中同源重组，PCR产物经0.8％琼脂糖凝胶电泳，以pAd Easy-1为对照，重组腺病毒质粒酶切可见一条23 kb左右的大片段和一条约4.5kb的特征性小片段，表明重组腺病毒质粒构建成功。 第二部分：重组腺病毒的包装、鉴定及表达，用脂质体(lipid body)转染法(infection protocol)，将重组腺病毒pAdTrack-PPARγ<,2>-CMV和pAdEasy-1共转染HEK293细胞，包装成pAdEasy-PPARγ<,2>腺病毒，确定转染效率。检测培养上清液病毒中PPARγ<,2>的存在后，将重组腺病毒基因转导到L02细胞中，经RT-PCR检测和Western blotting蛋白质表达，感染的重组PPARγ<,2>基因在L02细胞中能较高的稳定表达。 结果：RT-PCR检测结果显示，腺病毒Ad-PPARγ<,2>PCR产物约为470bp；用抗PPARγ<,2>单克隆抗体做western blotting为阳性，感染的重组腺病毒载体在L02细胞中PPARγ<,2>有较高的稳定表达。 结论：本实验成功构建携带小鼠PPARγ<,2>基因的腺病毒载体，为进一步研究PPARγ<,2>基因的功能，阐明PPARγ<,2>对肝癌的作用机制奠定了基础。