实验Ⅰ巴斯德毕赤酵母是表达外源蛋白最理想的真核表达系统之一，具有严格调控外源蛋白的表达、加工修饰表达产物、表达量高、营养要求低等优点。本实验利用PCR方法扩增得到牛精蛋白全序列，将其克隆插入到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的多克隆位点上，获得载体p9K-300。利用合成-扩增的方法得到去除内含子、优化的牛精蛋白基因序列，该基因用毕赤酵母菌偏好密码子替换野生型基因中毕赤酵母稀有密码子，同样将其克隆插入到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的多克隆位点上，获得载体p9K-160。上述两个载体与pPIC9K载体用Sall酶切线性化后，用电击转化法分别转化毕赤酵母菌株GS115。每一转化体系通过G418筛选、MM-MD平板筛选和菌落PCR鉴定后获得若干含有目的基因不同拷贝数的阳性Mut+型菌株，多数阳性菌株拷贝数高于3个。阳性菌株经诱导表达、采样，用尿素-SDS凝胶电泳分析并采取银染的方法，可见p9K-160载体阳性转化子菌株表达产物中有低分子量目的产物条带，但表达量不高，且表达量不随拷贝数增加而呈线性增长关系。p9K-300载体阳性转化子菌株表达产物中无目的产物条带。 实验Ⅱ肌肉生长抑制素(Myostatin，MSTN)又称GDF-8，属TGFβ，转化生长因子β超家族，它对骨骼肌生长有负调控作用，是肌肉生长发育的负调控因子。 世界知名的双肌肉牛品种皮尔蒙特牛是由于Myostatin突变造成的，在皮尔蒙特牛中，检出2个Myostatin点突变，其中的一个是外显子3的1056处G→A突变，导致编码的氨基酸由保守的半胱氨酸突变为酪氨酸，结果肌肉生长抑制素的功能全部或几乎全部丧失。 本实验参照已报道的皮尔蒙特牛Myostatin活性肽基因突变特征，用PCR法成功地从牛基因组DNA克隆了突变的牛Myostatin活性肽基因，并将此基因克隆到pEGFP-N载体中，构建了一个顺序含有hCMV启动子、突变Myostatin基因活性肽编码区、SV40PolyA加尾信号的真核载体。 在后续实验中，该载体将用于转染体外培养的动物肌肉细胞系，验证突变Myostatin活性肽是否会对正常Myostatin活性肽功能产生干扰作用。