血管内皮细胞功能异常是心血管疾病的初始事件。从细胞、分子水平研究在病理生理状态下内皮细胞的信号转导过程,对我们深入了解各种疾病的发生和发展有很大意义,也有助于我们研究药物的作用机制。本文的目的是研究在内皮细胞损伤和异常增殖过程中涉及到的信号转导途径,并对药物的作用机理从细胞、分子水平加以阐释。本文的主要工作如下:建立内皮细胞的氧化损伤模型,发现用过氧化氢刺激内皮细胞会使将近50%左右细胞死亡,而阿魏酸的加入可以起到保护细胞的作用,极大程度的恢复细胞活力,使其恢复到正常水平的90%左右。Griess试剂法检测NO含量的变化,发现损伤状态下伴有NO的大量释放,而阿魏酸可以减少NO的产生。应用蛋白免疫印迹方法,检测到阿魏酸可以抑制由过氧化氢引起的MAPK家族(ERK、p38、JNK)的激活,促进eNOS的表达,降低iNOS和ICAM-1的表达,起到了保护作用。建立内皮细胞的增殖模型,发现脂多糖促进内皮细胞蛋白质的合成和活细胞数增加,并促使内皮细胞从G0/G1期进入S期,从而诱发增殖;激活ERK途径和p38途径,不激活JNK途径;对eNOS的表达无显著性影响,促进iNOS和ICAM-1的表达。在此基础上再应用ERK抑制剂PD98059、p38抑制剂SB202190、NO供体SNP、NOS抑制剂L-NAME及PI3K抑制剂LY294002,以考察各信号之间的关联。发现PD98059、L-NAME及LY294002抑制LPS诱导的细胞增殖,使细胞滞留在G0/G1期。而SB202190、SNP促进了细胞增殖,使细胞进入S期。SB202190显著增加了ERK的磷酸化,LY294002抑制了iNOS的表达,L-NAME降低的ICAM-1的表达。综上,得出结论如下:1. LPS激活ERK和p38,而后者的激活负调控ERK;ERK的激活促进细胞增殖;2. PI3K激活iNOS促进NO产生;iNOS激活ICAM-13.以上两条通路各自独立的调控内皮细胞增殖过程,彼此对另外一条途径都不存在直接的影响。