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高速逆流色谱(High Speed Counter current Chromatography)，简称HSCCC，是由日本Yoichio Ito(伊东洋一郎)博士首先研制开发的一种新型色谱技术<[1]>，是利用螺旋管方向性与高速行星式运动相结合产生的一种独特的流体动力学现象，使样品中的各组分在相对移动的互不相溶的两相(一相为固定相，另一相由恒流泵连续输入，为流动相)中实现高效的接触、混合、分配和传递，并按照分配系数的不同依次洗脱而获得分离的一种完全的液液色谱<[2]>。与其它色谱技术不同的是它不需要任何固态载体，因而避免了分离样品与固态载体表面的相互作用而造成的失活、变性、污染及不可逆吸附等不良情况，它还具有高效、快速、上样量大、回收率高等优点，所以特别适合于天然产物的分离与纯化<[3]>。经过近30年的发展，随着其理论与技术的日益发展与完善，HSCCC已在生物、医药、食品、材料、农业、环保等领域获得了广泛的应用，尤其是在中药有效成分的分离纯化领域已成为最有优势的分离分析方法之一。
本文应用HSCCC，采用优化的实验条件对常用中药何首乌、青蒿、茯苓、金果榄中的有效成分进行了分离纯化，经HSCCC分离所得化合物的纯度由HPLC检测均大于95％，化学结构经核磁共振氢谱(<1>H-NMR)与碳谱(<13>C-NMR)得到了鉴定。为上述中药的药理研究与开发、中药及其制剂的鉴别以及质量控制提供了参考。
l.HSCCC分离纯化何首乌中的蒽醌类化合物建立了高速逆流色谱法分离纯化何首乌中有效成分的新方法。从200 mg何首乌粗提物Ⅰ中，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(5：5：8：2，v/v)的上相为固定相，下相为流动相，分离纯化得到20.6 mg大黄素(Ⅰ)和23.7 mg大黄素甲醚(Ⅱ)。从120 mg粗提物Ⅱ中，采用乙酸乙酯-甲醇-水(5：0.1：5，v/v)体系，分离纯化得到5.1 mg何首乌乙素(Ⅲ)，15.3 mg 2，3，5，4-二苯乙烯-2-β-D-葡萄糖苷(Ⅳ)，8.2 mg大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅴ)和6.7 mg决明葸酮-8-O-β-D-葡糖苷(Ⅵ)。经高效液相色谱分析，各组分的纯度均在95％以上。其化学结构由<1>H-NMR和<13>C NMR鉴定。
2．HSCCC分离纯化青蒿中的有效成分建立了高速逆流色谱法分离纯化中药青蒿中莨菪亭和三种黄酮类有效成分的新方法。两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，固定相为(5：5：3.5：6.5，v/v)体系的上相，以(5：5：3.5：6.5，v/v)和(5：5：5.5：4.5，v/v)体系的下相为流动相进行梯度洗脱。从320 mg青蒿粗提物中一步分离纯化得到21.2 mg莨菪亭(Ⅰ)，17.8 mg 5，3’，4’-三羟基-3，6，7-三甲氧基黄酮(Ⅲ)，23.5 mg 5，3’-二羟基-3，6，7，4’-四甲氧基黄酮(Ⅳ)，8.4 mg 5-羟基-3，6，7，3’，4’-五甲氧基黄酮(Ⅴ)。经高效液相色谱分析，各组分的纯度均在95％以上。其化学结构由其<1>H-NMR和>13>C-NMR数据鉴定。 3．HSCCC分离纯化茯苓中的三萜类成分建立了高速逆流色谱法分离纯化中药茯苓中五种三萜类成分的新方法。两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，固定相为(5：5：6：4，v/v)体系的上相，以(5：5：6：4，v/v)和(5：5：7：3，v/v)体系的下相为流动相进行梯度洗脱。一次从426 mg茯苓粗提物中分离得到9.1 mg去氢土莫酸，5.4 mg 3β-羟基-16α-乙酰氧基-羊毛甾-7，9(11)，24(31)-三烯-21-酸，4.7 mg猪苓酸C，9.3 mg茯苓酸，7.8 mg去氢依布里酸。所得化合物纯度均较高，均在95％以上，其结构经<1>H-NMR与<13>CNMR得到了鉴定。
4．HSCCC分离纯化金果榄中的四种非生物碱类成分应用高速逆流色谱法，从360 mg金果榄样品粗提物中分离纯化出了19.5 mg古伦宾(Ⅰ)，32.7 mg 24-epi-罗汉松甾酮A(Ⅱ)，16.5 mg 20-羟基蜕皮素(Ⅲ)。HSCCC溶剂体系为乙酸乙酯-正丁醇-1％醋酸(2：3：5，v/v)，在这一分离过程中，β-香树脂醇留在了固定相中，收集固定相蒸干后，得到18.6 mg β-香树脂醇。经高效液相色谱分析，纯度均大于95％，其化学结构由<1>H-NMR和<13>CNMR鉴定。