目的： 采用TaqMan-MGB探针技术，建立双重实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测DD3/PSAmRNA比值的方法，分别对良性前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PCa)患者尿液中DD3/PSAmRNA比值进行检测，并对其初步临床应用进行评价。 方法： 1.根据GenBank中DD3mRNA和PSAmRNA序列，分别在差异显示编码3(differentialdisplaycode3，DD3)基因的外显子1和3、前列腺特异性抗原(prostatespecificantigen，PSA)基因外显子1和2之间设计一对引物，DD3基因和PSA基因的TaqMan-MGB探针5’分别标记FAM和HEX荧光素，优化反应体系，建立双重实时荧光逆转录聚合酶链反应。 2.结果计算：用相对定量的研究方法分析实验结果。尿液DD3/PSAmRNA比值采用2-△Ct方法计算，ΔCt=Ct1-Ct2。 3.对本方法进行方法学评价，包括特异性、最低检测限和重复性等。 4.用双重实时荧光逆转录聚合酶链反应的方法对34例PCa和44例BPH患者前列腺按摩后尿液DD3/PSAmRNA比值进行检测，并对其初步临床应用进行评价。 结果： 1.成功建立了双重实时荧光逆转录聚合酶链反应检测尿液DD3/PSAmRNA比值的方法。本方法中，扩增产物经证实分别为DD3mRNA和PSAmRNA的特异性片段；以LNCaP细胞cDNA作模板，PSAmRNA和DD3mRNA最低检测限分别为0.6细胞/反应和60细胞/反应；DD3/PSAmRNA比值批内、批间变异系数分别为3.8％～4.7％和4.0％～4.9％。 2.PCa组尿液DD3/PSAmRNA比值明显高于BPH组，两者差异具有统计学意义(P＜0.01)。 3.尿液DD3/PSAmRNA比值诊断前列腺癌的ROC曲线下面积(AuC)为0.746(95％CI:0.630～0.862)，当截断值为0.254时其敏感度和特异度分别为64.7％和77.3％，其阳性率与临床和病理分级均无关。研究中有一位病理诊断为“左叶前列腺不典型增生，建议免疫组化除外高分化腺癌”的患者尿液DD3/PSAmRNA比值为5.31，由此推测我们的研究可能有助于诊断前列腺癌前病变。 结论： 1.成功建立了双重实时荧光逆转录聚合酶链反应检测DD3/PSAmRNA比值的分子生物学诊断方法，该方法具有特异、灵敏和重复性好等特点。 2.双重实时荧光逆转录聚合酶链反应检测前列腺按摩后尿液DD3/PSAmRNA比值对前列腺癌诊断具有较高特异度和敏感度，且节省操作时间、降低实验成本，有望成为前列腺癌早期诊断的有效方法。