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目的:建立大鼠重症急性胰腺炎模型。观察急性胰腺炎发生过程中自噬活性的变化,探讨其病理意义。观察同种异体骨髓间充质干细胞移植对重症急性胰腺炎自噬的影响,阐明MSCs治疗重症急性胰腺炎的分子机制。方法:将健康体重250±50克,5-6周龄的雌性SD大鼠随机分为正常对照组,SAP模型组,SAP+MSCs移植组。每只大鼠尾静脉注射自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)2×109,在室温22-28℃,相对湿度40-70%的动物房内适应性喂养一周后开始造模,造模前12h起禁食不禁水。采用腹腔注射20%L-精氨酸的方法建立SAP大鼠模型,正常对照组给予等量生理盐水腹腔注射。造模前一周取雄性健康SD大鼠做MSCs培养,将培养好的同种异体SD大鼠第三代MSCs作为种子细胞,在SAP+MSCs移植组大鼠腹腔注射第一次精氨酸后即开始尾静脉注射,注射量为5×106个/只,SAP模型组及正常对照组均予尾静脉注射同体积0.9%NaCl溶液,所有大鼠均禁食不禁水。分别在开始造模6h、12h、24h、48h、72h,分别在三组动物中抽取静脉血,分离制作血清,-200C保存,检测不同时间点血淀粉酶、IL-6、TNF-α、以及胰蛋白酶原激活肽的含量。分别在以上5个时间点每组分别处死5只动物,打开腹腔,观察胰腺周围有无水肿及渗出。按上述固定的各时间点取胰腺、肺、肾组织标本,石蜡包埋,切片,HE染色,采用盲法在光镜下读片,进行胰腺组织病理学评分;同时做石蜡切片在荧光显微镜下采用GFP-LC3等融合蛋白来示踪自噬形成,免疫印迹法检测大鼠胰腺组织LCⅡ,以及12h大鼠胰腺组织PI3K、p-PI3K、mTOR、p-mTOR蛋白表达,用Image J软件分析蛋白条带进行灰度值计算,得到目的蛋白的相对含量。全部数据使用SPSS18.0统计软件进行分析,计量资料以?x±s表示,两样本均数比较采取t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果与正常对照组相比,SAP组胰腺组织充血水肿,炎症细胞浸润,部分胰腺结构模糊甚至消失;胰腺组织病理学评分增加,血清淀粉酶、胰蛋白酶原激活肽、TNF-α和IL-6水平均升高(P<0.05)。荧光显微镜下观察SAP组大鼠胰腺组织自噬相关超微结构明显增多,免疫印迹法显示与对照组相比,6h、12hSAP组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达显著增多(p<0.05);与模型组相比,移植组胰腺组织病理学评分下降,血清淀粉酶、胰蛋白酶原激活肽、TNF-α和IL-6水平均降低(P<0.05),免疫印迹法显示与SAP组相比,移植组大鼠自噬相关蛋白LC3-Ⅱ有所减少(p<0.05);24h、48h、72h三组相比无统计学意义(P〉0.05)。12h胰腺组织PI3K、p-PI3K、mTOR、p-mTOR蛋白的表达显示,3组PI3K、mTOR蛋白表达无显著性差异(P〉0.05),与对照组相比,模型组p-PI3K、p-mTOR蛋白表达明显增加(p<0.05);与模型组相比,移植组p-PI3K、p-mTOR蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论重症急性胰腺炎可诱导增强自噬的发生,自噬促进胰蛋白酶原的激活,并参与胰腺的损伤;骨髓间充质干细胞有可能通过PI3K-AKT-mTOR信号通路抑制自噬的发生,从而减轻胰腺炎以及胰腺炎相关的多脏器损伤。