红茶和绿茶多酚与猪胰腺α-淀粉酶相互作用的酶催化动力学和荧光猝灭研究

被引量 : 2次 | 上传用户:studycomputer1
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:本研究旨在以猪胰腺α-淀粉酶(porcine pancreaticα-amylase, PPA)作为人唾液α-淀粉酶(human salivaryα-amylases, HSA)的蛋白质模型,通过酶的动力学和荧光猝灭实验,从分子水平考察红/绿茶茶多酚(tea polyphenols, TP)抑制PPA催化水解淀粉的效果和特异性,以及对PPA蛋白质内源性荧光的猝灭效果,从而为解释红/绿茶TP对口腔感觉的收敛性作用和酶抑制类型的生理意义奠定理论基础。方法:在不间断540nm波长下,测量PPA催化生成的麦芽糖的吸光度增加值,通过动力曲线的直线段的斜率获得反应速度,由Lineweaver–Burk图求出动力学参数(Vmax和Ks),统计学分析确定抑制类型。滴加不同浓度的红/绿茶TP溶液,以295nm波长(λex)检测PPA的荧光强度,通过获得的荧光光谱计算Stern-Volmer猝灭常数(KSV)、双分子猝灭常数(kq)、表观静态猝灭常数(Kapp)、动态猝灭常数(KD)和静态猝灭常数(KS)。结果:无抑制剂和红茶抑制剂的最大反应速度(Vmax)之间的差异具有统计学意义(P<0.05),无抑制剂和绿茶抑制剂的酶–底物解离常数(Ks)之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。红茶抑制剂解离常数(Ki)值高于绿茶(P<0.05)。同一品牌TP的动、静态猝灭常数(KD与KS)之间的差异具有统计学意义(P<0.05);双分子猝灭常数(kq)大于双分子扩散限制性猝灭常数值(1×1010M-1s-1),伴随红/绿茶TP溶液浓度增加,荧光发射波长(λem)发生红移。红/绿茶多酚与PPA在Trp59上存在一个结合位点(n = 1)。红/绿茶猝灭剂对PPA荧光猝灭的距离作用的K存在统计学意义(P<0.05),红茶的表观猝灭常数大于绿茶(P<0.05)。结论:红茶TP对PPA的抑制为非竞争性抑制型,绿茶TP对PPA的抑制为竞争性抑制型。红茶抑制剂既能与自由酶的活化中心位点结合,也能与酶-底物上的位点结合,而绿茶抑制剂仅能与活化中心位点结合。红/绿茶对PPA的荧光猝灭同时存在三种机制,除了动态和静态猝灭外,还存在距离作用。猝灭反应是以形成基态复合物为主的静态猝灭,且红/绿茶TP猝灭效果相同。红/绿茶TP对PPA的荧光猝灭反应引起了PPA的分子构象发生改变。
其他文献
会计稳健性是财务报告的一项重要特征,而投资效率则是企业生存和发展至关重要的制约因素,稳健的会计政策对企业投资效率的影响值得深入探讨。通过实证研究发现,会计稳健性越
铁路客户服务中心的成立是铁路走向市场化的一个重要举措。结合呼叫行业的特点及铁路客货运输的实际情况,对成都铁路客户服务中心在为客户服务过程中的质量管理进行探讨。通
分析了纺织品染整加工过程中产生病疵的外观形态,形成原因及染整病疵常见的类型。
目的探讨儿科呼吸系统反复感染患儿的临床治疗体会。方法选取82例呼吸系统反复感染患者作为研究对象,对照组41例患儿采用常规治疗方法,研究组41例患儿在常规治疗基础上使用顺
多属性决策是决策理论的重要组成部分,是运筹学与管理科学的重要分支,广泛应用于信息科学、经济管理、军事等众多领域。由于决策环境的复杂性和决策者认知的不完全性,模糊理
对籼粳杂交稻甬优9号进行不同氮肥用量和栽插密度试验,探索其在低产田最佳的施氮量和栽插密度。结果表明,甬优9号在低产田667 m2氮肥用量以13~15 kg为宜,栽插密度应控制在1.3
在经济金融日益全球化的今天,掌握一种国际货币的发行权对于一国经济的发展具有十分重要的意义。人民币国际化问题20世纪90年代就被学术界提出,并对国际化的各方面问题进行了
目的建立人类偏肺病毒(Human Metapneumovirus HMPV)和人类人类冠状病毒OC43(Human Coronavirus OC43,HCoV-OC43)实时荧光定量PCR (real-time Fluorescent Quantitative FQ-
城市公共交通在我国城市交通中占有重要的地位 ,是同我国城市居民生产、生活等活动密切相关的系统。公交客流信息是公交调度管理及线网优化的基础 ,公交IC卡的应用为公交信息
在小学语文课堂教学中实施创新教学是教师们一直研究的重要课题。本文就在小学语文教学中如何实施创新教育作了思考和探索。