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【目的】目前，自体软骨细胞移植术（ACI）是治疗大面积关节软骨缺损的首选方法。ACI技术现已发展到第三代技术，也称为基质诱导的自体软骨细胞移植技术（MACI）。然而，MACI技术仍难以生成理想的透明软骨修复软骨缺损区，并且修复效果不稳定。因此，如何对MACI技术中软骨细胞的体外扩增，支架材料，细胞复合支架材料的共培养等条件优化改进，成为解决这一问题的关键，这也是目前软骨组织工程研究的热点。本研究通过比较体外静态与动态培养两种方式对培养人关节软骨细胞复合Ⅰ型胶原支架材料的效果，从而探索体外构建MACI手术中修复关节软骨缺损区移植物的适宜条件及方式。 【方法】取人关节软骨组织，体外分离消化成软骨细胞，单层培养扩增至P2代，免疫荧光表型鉴定。将P2代软骨细胞接种于Ⅰ型胶原支架上，随机分为三组，A组采用静态培养，B组于微重力生物反应器中动态培养，C组继续采用单层培养。体外培养7d后，采用倒置相差显微镜观察细胞形态；荧光显微镜、SEM、HE染色观察细胞在支架上的分布、黏附、生长及形态特点；实时荧光定量PCR检测软骨细胞表型特异基因(COL-2)的表达情况，并进行统计学分析。 【结果】体外分离培养的 P2代软骨细胞倒置显微镜观察细胞形态呈多角形为主，Ⅱ型胶原蛋白表达阳性，提示 P2代细胞表型维持良好；荧光显微镜观察：与 A组比较，支架内B组细胞数量较多且分布均匀；SEM观察示：空白支架多孔结构，A组软骨细胞在支架表面分布较少，黏附于支架表面，B组软骨细胞在支架表面大量生长，融合成片，形态规则；HE染色结果：空白支架横断面内部明显多层孔隙结构，A、B组样本大体结构及内部孔隙结构均保持完整，孔隙内均可见细胞黏附，B组孔隙内细胞数量及细胞外基质优于 A组；RT-PCR检测：A、B组软骨细胞 COL-II基因表达水平较单层培养组明显增加，A、B组之间 COL-II基因表达水平无统计学差异。 【结论】软骨细胞与Ⅰ型胶原支架复合后，与静态培养相比，体外动态培养可明显促进细胞增殖及细胞外基质分泌；与单层培养相比，动态及静态培养可明显提高软骨细胞 COL-II基因表达水平。因此，利用自体软骨细胞复合Ⅰ型胶原支架体外动态培养方式构建的软骨移植物，可用于MACI手术修复软骨缺损。