皂荚皂苷的分离纯化及毒性研究

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皂荚(Gleditsia sinensis Lam.)为豆科落叶乔木,在我国分布广泛,其荚果、种子和棘刺具有不同的药用价值,目前,对皂荚的研究主要集中在皂苷的分离鉴定及粗提物的临床功效方面,而对其有效成分三萜皂苷单体的活性少有报道,本文对皂荚果实中的皂苷进行分离纯化及毒性研究,取得以下结果:1.皂荚中皂苷类成分的分离与鉴定:采用70%乙醇渗漉提取,正丁醇萃取,常压硅胶柱反复层析结合薄层色谱法从皂荚果实中分离到一个含有7个糖基的三萜皂苷,通过TLC、mp、IR、MS、1H-NMR和13C-NMR的分析方法确定为3-O-β-D-吡喃木糖基(-1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基(-1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基齐墩果酸28-O-β-D-吡喃木糖基(-1→3)-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[(6S,2E)-6-羟基-2,6-二甲基-2,7-辛二烯醇-(1→6)] -β-D-吡南葡萄糖酯,即皂荚皂苷A。2.皂荚皂苷A对小鼠的毒性试验:经口灌胃给药,测得皂荚皂苷A对小鼠的半数致死量(LD50)为508.31mg/kg,95%可信区间为449.40mg/kg~574.95mg/kg。经口灌胃给药进行为期30d的亚急性毒性试验,对试鼠进行日常观察、体重、血常规、血液生化指标的测定及病理组织切片的观察,综合分析,皂荚皂苷A对小鼠肝、肾、脾和肺脏有一定损害。3.皂荚中总皂苷提取工艺优化及含量测定:采用香草醛-浓硫酸比色法,以分离纯化出的皂荚皂苷A为对照品,建立分光光度法测定皂荚总皂苷含量的方法;考察甲醇浓度、提取时间、提取次数对皂荚总皂苷得率的影响并用正交试验优化其工艺条件;测定6~11月皂荚中总皂苷的含量。结果表明,在浓度为0~164.64μg/mL的线性范围内,回归方程为A=0.0019C-0.0020,R=0.9993(n=7);三因素对提取率的影响顺序为:提取次数>甲醇浓度>提取时间,皂荚总皂苷提取的最佳工艺参数为:75%甲醇,提取60min,提取2次;6、7、8、9、10、11月份皂荚中总皂苷的含量分别为13.60%、14.67%、15.25%、22.96%、20.17%和15.82%,其中9月份皂荚中总皂苷含量最高,其次是10月份,6月份最低。
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