论文部分内容阅读
目的:Th9细胞是最近几年才被发现和确认的一种新的T辅助细胞亚群(Th细胞亚群),研究已证明,在人类某些恶性肿瘤疾病中,Th9细胞的表达水平明显升高。然而,Th9细胞在肝癌恶性腹水(Malignant ascites,MA)中如何调节抗肿瘤免疫反应等问题仍有待探讨。为了研究Th9细胞在肝癌恶性腹水的发生及募集浸润至腹膜腔的机制,我们对MA及其同源外周血中趋化因子/趋化因子受体相互作用进行研究。同时,我们还对比研究了 Th9细胞及其分泌的主要细胞因子IL-9在MA、同源外周血和健康对照组中的表达情况,探讨它们是否参与了肝癌恶性腹水的发病机制。方法:30例符合要求的肝癌恶性腹水患者和15例健康对照被纳入本研究。流式细胞术检测Th9细胞、CCR4和CCR6的表达水平。样本中趋化因子CCL20、CCL22和细胞因子IL-9的浓度采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行检测。用磁珠免疫细胞分选方法从肝癌外周血中分选出纯的初始CD4+T细胞,然后使用TranswellTM系统检测趋化因子CCL20和抗CCL20对Th9细胞的趋化效应。结果:1.MA中Th9细胞比例与其匹配外周血以及健康对照组相比明显升高;同时,MA中的Th17细胞比例亦较其匹配外周血和健康对照组明显增高;MA中IL-9的浓度不仅和Th9细胞数量呈正相关,而且还和Th17细胞数量呈正相关。2.MA中IL-9浓度明显高于相应外周血清以及健康对照组。同样,MA中IL-17浓度明显高于匹配外周血清以及健康对照组。3.MA中趋化因子CCL20和CCL22浓度明显高于匹配外周血清。MA及其匹配外周血中Th9细胞均高表达趋化因子CCL20受体CCR6,然而,MA和其匹配外周血中Th9细胞低表达趋化因子CCL22受体CCR4。4.本研究体外趋化迁移实验表明,肝癌MA上清具有趋化诱导Th9细胞迁移的能力,当用中和抗体阻断CCL20时,这种趋化效应明显减弱。5.对MA中Th9细胞数量与患者生存率的研究发现,它们之间存在明显的相关性,而且,Th9细胞低比例组患者的生存期明显高于Th9细胞高比例组患者的生存期,Th9细胞高比例组患者的死亡风险比是Th9细胞低比例组患者的2倍。6.MA中Th9细胞的比例和MA中甲胎蛋白的浓度呈正相关,而和癌胚抗原、C反应蛋白、乳酸脱氢酶、天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶均无相关性。结论:1.MA中趋化因子CCL20具有较强的趋化Th9细胞的功能,Th9细胞募集浸润至腹膜腔的机制与CCL20/CCR6趋化轴密切相关。2.MA中Th9细胞比例与肝癌腹水患者生存期相关,提示:MA中Th9细胞比例的增多可能可以作为MA患者死亡风险升高和生存期降低的有效预测指标。3.Th9细胞可能在肝癌恶性腹水的发病机制中发挥重要作用,提示Th9细胞可能是恶性肿瘤干预治疗合适的细胞靶点。