【摘 要】
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泛素是一个普遍存在于真核细胞中的小分子量蛋白,几乎参与了所有细胞生命活动,尤其是绝大多数短寿蛋白质的降解。泛素可以多种不同形式结合于底物并进行多种翻译后修饰,由此
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泛素是一个普遍存在于真核细胞中的小分子量蛋白,几乎参与了所有细胞生命活动,尤其是绝大多数短寿蛋白质的降解。泛素可以多种不同形式结合于底物并进行多种翻译后修饰,由此形成数量庞大信息复杂的泛素密码系统,实现对细胞生命活动的精准调控。一旦泛素化系统中的其中一个环节出现问题,将可能引起相关的疾病,如肿瘤、神经退行性疾病、免疫系统疾病等均与泛素化系统的功能失调有关。因此泛素化系统中的异常环节也成为治疗相关疾病的重要靶点。Parkin是一个RBR E3,研究发现Parkin的异常存在于许多帕金森病例中,同时也与线粒体自噬密切相关。研究Parkin的泛素化底物,对与Parkin异常相关的疾病的研究与治疗具有重大的意义。经过精密的突变改造后正交泛素转移途径是鉴定特定E3的蛋白底物的有效方法。为了建立Parkin的特殊泛素化途径,本研究里使用带有NNK密码子的PCR引物,随机化parkin的E2结合位点的序列,利用噬菌体展示技术筛选出带有E426R,N428R的双突变体x Parkin,设置各种体外酶联反应确认了x Parkin于x UB-x Uba1-x Ubc H7途径的完全适用性,以及在HEK 293细胞中的表达情况,为后续在错综复杂的泛素传递网络中鉴定Parkin的泛素化底物做好前期工作。
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