壶瓶碎米荠硒氨基酸形态及其对低硒电磁辐射雄性大鼠生殖保护作用

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本文以SD雄性大鼠为研究对象,建立了低硒电磁辐射生殖损伤模型,探讨电磁辐射对低硒大鼠的生殖损伤作用。以壶瓶碎米荠的水提物粉末为研究对象,分析其硒形态,通过给予低硒电磁辐射模型下的大鼠灌胃壶瓶碎米荠水溶液,研究壶瓶碎米荠硒溶液对低硒电磁辐射大鼠的生殖保护作用,接着比较4种不同形态的硒在该方面的活性,为电磁辐射对雄性生殖功能可能带来的损害提供预防手段,也为壶瓶碎米荠的开发利用提供新的研究思路。主要研究结果如下:1.壶瓶碎米荠硒形态的分析本实验采用有机试剂环己烷萃取样品中的有机硒,利用原子荧光光谱法测定硒的含量,分析样品的总硒、无机硒和有机硒含量,研究发现样品总硒含量高达1271.99±62.61mg/kg,有机硒含量在80%以上,是一种超富有机硒植物。采用四种硒形态的提取方法,分别为沸水浴、1:2甲醇水处理、2:1甲醇水处理、蛋白酶处理,比较它们的提取效率,发现蛋白酶的硒形态提取方式最好,该方法处理的样品总硒含量占未处理样品总硒含量的70.17%,并且五种硒形态的总硒含量占处理后样品硒含量的75.58%。再对蛋白酶提取方法进行准确度验证,包括检出限和加标回收率实验,得出混标中硒胱氨酸(SeCys2),硒甲基硒代半胱氨酸(L-SeMeSeCys),硒蛋氨酸(SeMet),六价硒(SeVI),四价硒(SeIV)五种硒形态的检出限分别为5.18,4.78,8.28,6.81,2.49μg/L,各形态的硒的加标回收率都在80%以上。样品中的硒形态主要为硒胱氨酸(SeCys2),占五种硒形态的70%以上。2.低硒辐照大鼠生殖损伤模型实验采用断乳的雄性SD大鼠,饲喂含硒量为0.02ppm的缺硒饲料,通过监测大鼠血清硒含量来建立低硒大鼠模型,当血清硒含量小于0.2μg/ml时继续测定血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),当低硒模型组该酶含量显著低于对照组时,模型构建成功。实验结果显示大鼠建立低硒模型的时间为四周,此时对照组大鼠血清硒含量为0.48μg/ml,低硒模型组的含量为0.131μg/ml,模型组的GSH-Px活性显著低于对照组。然后在低硒SD雄性大鼠模型上,使用频率为1800MHz,功率密度为(P)1mW/cm2,特定比吸收率(SAR)为0.68W/kg的电磁辐射强度对大鼠进行每天2小时连续辐照,一共辐照五周,观察其生殖损伤情况发现,辐照会对低硒大鼠造成损害,具体包括使大鼠体重增加量减少,肝脏和睾丸的硒含量减少,精子数量减少,精子畸形率增加,睾丸组织形态异常,细胞凋亡严重,睾丸组织的抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性也有一定程度的降低,血清睾酮T性激素含量降低。而正常硒饮食的大鼠,体内硒含量充足时,能够在一定程度上维持机体各参数处于正常水平。3.壶瓶碎米荠水溶液对低硒辐照大鼠的生殖保护作用采用三种不同硒剂量的碎米荠水溶液给低硒电磁辐照大鼠灌胃给药,剂量分别为12.5μg/kg(最佳剂量的2倍),25μg/kg(最佳剂量的4倍),40μg/kg(最佳剂量的6倍),研究壶瓶碎米荠对低硒电磁辐照大鼠的生殖影响。实验结果发现,三个水平的补硒剂量,均在不同程度上对低硒辐照受损的大鼠受损状况有所改善,包括使大鼠的体重增加量得到提升,精子数量上升,精子畸形率降低,各组织的硒浓度随着补硒剂量上升而增加,降低了丙二醛(MDA)浓度,增强了总抗氧化能力(T-AOC),使睾丸组织三种主要的抗氧化酶活性(GSH-Px、CAT、T-SOD)增强,血清睾酮的含量增加。综合实验的结果,25μg/kg补硒浓度对改善机体的效果最好。4.不同硒氨基酸形态对低硒辐照大鼠的生殖保护作用对壶瓶碎米荠中三种主要的硒氨基酸研究对低硒电磁辐照大鼠的生殖影响,并与壶瓶碎米荠作比较,4种硒形式,分别为硒胱氨酸(SeCys2)、硒蛋氨酸(SeMet)、硒甲基硒代半胱氨酸(SeMC),碎米荠水溶液,灌胃剂量采用25μg/kg。实验可知各补硒形式均能在一定程度上缓解电磁辐射带来的生殖损伤,比较相同硒剂量下的各补硒形式发现,硒甲基硒代半胱氨酸和碎米荠的补硒效果最好,值得被开发利用,硒胱氨酸的效果最差,可能与其代谢方式有关。
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