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背景:牙周炎是常驻共生菌群与宿主之间的体内平衡丧失所致的常见口腔疾病,是造成牙松动、移位甚至脱落的主要原因,对咀嚼、消化和其他全身炎症性疾病影响甚重。目前有效治疗措施包括牙周基础治疗、翻瓣术、引导性骨/组织再生术等,但牙周炎症不易控制,临床上牙周治疗失败的原因也往往在于此,强烈的炎症反应逐级放大,牙周组织将进一步破坏。在宿主介导的免疫炎症反应中,白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)发挥着非常关键的作用,然而白细胞介素1受体拮抗剂(Interleukin-1 receptor antagonist,IL-1RA)可以通过与IL-1 受体结合达到阻断IL-1β的效果,过程中不刺激宿主细胞或触发任何细胞内信号传导,是抑制牙周炎症的另一良好选择。但是其半衰期较短、易被机体清除,限制了 IL-1RA的临床治疗效果,因此探究一种适合于IL-1RA的药物载体以延长其生物活性、提高临床疗效成为了当前迫切需求。本研究分别使用水包油包水型(water in oil in water,W/O/W)和水包油包固型(solid in oil in water,S/O/W)复乳溶剂蒸发法制备了载IL-1RA微球,检测其理化特性和体外抗牙周炎症的能力,为其在牙周炎治疗中的应用提供理论依据。方法:1、采用S/O/W法制备PLGA/玻璃体&IL-1RA复合微球,采用W/O/W法制备PLGA&IL-1RA微球作为传统方法对照。2、通过倒置荧光显微镜和扫描电镜观测微球的形貌和粒径,利用IL-1RA Elisa试剂盒检测微球的载药率、包封率和体外释放特性。3、取临床上拔除阻生齿时需要修整的牙龈组织,无菌提取人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs),传代培养,做免疫组化鉴定。4、采用CCK8法检测微球的细胞毒性:将HGFs与微球共培养,配成微球浓度分别为0.1、1、10、100、1000、10000μg/mL,空白对照只加无血清培养基,每种浓度5个复孔。24h后酶标仪法检测微球对HGF细胞增殖的影响。5、微球体外抗炎活性检测:IL-1β刺激HGFs的方法模拟牙周炎细胞模型。首先将HGFs与PLGA/玻璃体&IL-1RA复合微球和PLGA&IL-1RA微球的3天浸提液共培养3h,加入IL-1β刺激24h,应用RT-qPCR技术检测炎症相关因子mRNA表达。为探究PLGA/玻璃体&IL-1RA复合微球的长期抗炎效应,取不同区间(0-3、3-7、7-10、10-14、14-17和17-21天)的微球释放液与HGF细胞共培养3h,加入IL-1β诱导炎症24 h后检测IL-6、MMP-1和TNF-α的表达情况。结果:1、S/O/W法制备的PLGA/玻璃体&IL-1RA复合微球呈球性良好,表面光滑圆整,平均尺寸为12.76±4.89μm,包封率达67.02%左右,且体外释放几乎为零级释放,时间长达50天。而W/O/W法制备的PLGA&IL-1RA微球表面孔隙多,相互粘连,包封率、载药率较低,存在突释效应。2、HGF细胞呈长梭形,少数呈角形或星形,细胞核位居中央,生长曲线大致呈倒“S”型。免疫组化染色结果Vimentin(++),Cytokeratin(-)。3、两种方法下合成的微球即使在10000μg/mL高浓度下的微球仍无明显细胞毒性(P<0.05)。4、PLGA/玻璃体&IL-1RA复合微球和PLGA&IL-1RA微球的3天浸提液与HGF 共培养,IL-6、MMP-1、TNF-α 的 mRNA 水平显著下降(P<0.05)。PLGA/玻璃体&IL-1RA复合微球各释放区间与HGF细胞共培养,炎症相关基因表达量均明显低于IL-1β刺激组(P<0.01)。结论:1、S/O/W法制备的PLGA/玻璃体&IL-1RA复合微球呈球性良好,表面光滑,大小均匀,包封率较高,释放几乎为零级释放,优于传统W/O/W法。2、PLGA/玻璃体&IL-1RA复合微球具有良好的生物相容性3、PLGA/玻璃体&IL-1RA复合微球可有效抑制IL-1β诱导HGF细胞的炎症反应,且随着药物的缓慢长效释放,抗炎作用持久。