论文部分内容阅读
研究目的:已知促红细胞生成素(EPO)具有血管生成素活性,但其对眼血管生成的作用还不清楚。临床研究表明外源性给予重组人促红细胞生成素(rHuEPO)可能促进早产儿视网膜病变(ROP)的发生和发展。因此,本研究通过建立氧诱导的视网膜病变鼠模型,观察内源性EPO在视网膜血管发育和新生血管形成中的蛋白动态表达情况,并与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达规律相比较,以期初步研究EPO在ROP病变发展中的作用。研究方法:健康生后7天(P7)C57BL/6J幼鼠32只,随机分为模型组、对照组和正常发育组。其中10只建立高氧诱导模型作为模型组;对照组10只和正常发育组12只于自然环境饲养;前两组于生后12、17天各处死5只;正常发育组于生后9、12、15、18天各处死3只。采用视网膜铺片和ADP(二磷酸腺苷酶)染色、病理切片常规HE染色及免疫组织化学检测方法,分别观察视网膜血管的改变、视网膜新生血管内皮细胞核数目及EPO和HIF-1α蛋白的表达情况。Olympus显微摄像系统采集图片,图像分析软件进行蛋白的累积光密度(IOD)值测定。对IOD值进行分析和比较,实验数据以均数±标准差((?)±s)表示,用SPSS12.0软件包处理。正常发育组不同时限的光密度值采用方差分析:模型组和对照组间采用成组设计的t检验;同组两种蛋白表达的相关性,采用Pearson相关性分析。研究结果:1、视网膜新生血管分析ADP染色视网膜铺片显示:正常发育组和对照组随着鼠龄的增加,视网膜完全血管化;模型组P12时视网膜血管的中心区和中周部出现无灌注;P17时在中周部灌注区与无灌注区的连接处出现新生血管丛。HE染色也显示模型组P12时视网膜周边部血管淤滞,神经纤维层存在血管闭锁;P17时毛细血管于神经纤维层和内核层明显增殖,并突破内界膜进入玻璃体内,在视网膜前形成新生血管。2、正常发育组不同时限视网膜EPO蛋白表达EPO的阳性反应产物呈棕黄色点状或颗粒状。在视网膜神经节细胞层及神经纤维层可见EPO阳性颗粒。正常组EPO随视网膜血管发育呈动态表达,P9时其IOD值为8.52±0.92,P12有明显升高,达到20.85±0.72,以后三个时段之间没有明显差异,持续在较高水平。3、高氧诱导模型视网膜EPO蛋白表达对照组P12、P17视网膜神经节细胞层及神经纤维层可见EPO蛋白表达;模型组P12视网膜各层及内界膜附近棕黄色颗粒明显减少,P17可见EPO蛋白表达显著增加,位于视网膜神经节细胞层、内核层及突破内界膜的新生血管,与正常组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。4、高氧诱导模型视网膜HIF-1α蛋白表达HIF-1α的阳性反应产物呈棕色。对照组P12、P17及模型组P12视网膜各层及内界膜附近未见HIF-1α阳性颗粒。模型组P17可见HIF-1α蛋白表达在神经节细胞层和突破内界膜的新生血管,与正常组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。5、EPO和HIF-1α蛋白表达相关性对模型组P17幼鼠视网膜EPO和HIF-1α两种蛋白的IOD值进行相关性分析。模型组P17的EPO和HIF-1α蛋白的IOD值呈正相关(P＜0.05)。结论1.视网膜EPO蛋白表达与视网膜血管发育有一定的时空关系,我们推测EPO可能参与正常视网膜血管发育过程。2.EPO在模型组不同时间位点的动态表达变化与ROP的两期病理变化相一致,我们推测EPO可能参与ROP视网膜新生血管增殖过程3.在视网膜新生血管增殖中EPO与HIF-1α蛋白表达呈正相关,推测HIF-1α可能参与缺氧状态下视网膜新生血管增殖中EPO的调节过程。4.EPO在视网膜新生血管增殖中的作用,有可能为ROP的预防和治疗找到全新的干预靶点,尤其在rHuEPO已广泛用于临床治疗早产儿贫血时,更应该警惕EPO对早产儿发生ROP的影响。