固定化酶相较于游离的酶有贮存稳定性高、活力强、回收易等一系列优点。因此,人们很早之前就对酶的固定化展开了研究。最开始是单酶的固定化,接下来人们开始研究多酶体系的固定化,但一开始的多酶体系的固定化是相对粗狂的。为了提高酶的协同作用,更好的提高多酶体系的催化效率,定序定量的固定多酶体系变成为当今需要研究的重点。本课题就是为定序定量的固定双酶体系提供一种新的方案。首先,要固定双酶体系先要选择合适的固定化载体。本课题选择的是氨基改性过的四氧化三铁磁性微球。因为,相较于其他的固定化材料,磁性高分子微球具有许多优点,而四氧化三铁磁球是其中应用最广泛的一种。然后,涉及固定化方法的选择。本课题选择利用锚定蛋白与黏连蛋白的特异性结合的特性,将我们所需固定的双酶体系连接在锚定蛋白上,再将支架蛋白连接在磁球上,这样不但实现了特异性固定,而且可以通过控制黏连结合域的多少来控制负载量,从而实现双酶体系的可定序、定量固定。最后,要固定的双酶体系的选择。我们选择的是葡萄糖氧化酶以及一段具有催化活性的寡聚核苷酸链G-quadruplex,不但因为这样两种酶的催化反应可以通过简单的显色来判断,而且G-quadruplex是一段核酸单链,可以通过简单的延长并连接上葡萄糖氧化酶,这样不仅极大的缩短了级联反应的传质距离而且避免了两种酶由于距离过近而相互影响活性。在这项研究中,我们使用支架蛋白的结构特异性来固定葡萄糖氧化酶和G-quadruplex双酶系统。最终的固定化酶活性为3838 U/g Fe3O4磁性纳米颗粒。