【摘 要】
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蜂胶是蜜蜂(Apis mellifera)采集植物树脂并混合上颚腺、蜡腺等腺体的分泌物而形成的混合胶状物,是一种应用历史悠久的天然药物,具有广泛的生物学活性和丰富的化学成分。不同类型的蜂胶化学成分差异大。影响蜂胶化学成分的因素很多,如胶源植物种类、采集时间、采集地理位置以及蜜蜂品种等,其中胶源植物是影响蜂胶成分的最重要因素。在本研究中,我们首先对比了中国蜂胶、巴西绿蜂胶和澳大利亚蜂胶的化学成分差异
【基金项目】
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国家自然科学基金(31272512); 国家蜂产业技术体系建设专项(CARS-44);
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蜂胶是蜜蜂(Apis mellifera)采集植物树脂并混合上颚腺、蜡腺等腺体的分泌物而形成的混合胶状物,是一种应用历史悠久的天然药物,具有广泛的生物学活性和丰富的化学成分。不同类型的蜂胶化学成分差异大。影响蜂胶化学成分的因素很多,如胶源植物种类、采集时间、采集地理位置以及蜜蜂品种等,其中胶源植物是影响蜂胶成分的最重要因素。在本研究中,我们首先对比了中国蜂胶、巴西绿蜂胶和澳大利亚蜂胶的化学成分差异,并建立了统一的检测方法区分不同类型的蜂胶。杨属型蜂胶是世界上分布最广的蜂胶类型,中国产的大部分蜂胶属于此类蜂胶。但中国幅员辽阔,且有丰富的植物资源,所以中国不同地区蜂胶可能存在较大差异。本研究利用相似度分析和聚类分析分析了中国不同产地蜂胶指纹图谱的差异,发现长白山蜂胶中p-香豆酸和CBE两个化合物的含量十分丰富,并分离、纯化并制备了化合物CBE,经质谱和核磁共振鉴定该物质为p-香豆酸苄酯。此外,研究了长白山蜂胶对不同癌细胞系的抑制作用,发现其能够显著抑制SGC-7901细胞的增殖。主要研究结果如下:1.中国蜂胶、巴西绿蜂胶和澳大利亚蜂胶化学成分的差异建立了 HPTLC和HPLC法,分析了中国蜂胶、巴西绿蜂胶和澳大利亚蜂胶,结果表明不同类型的蜂胶化学成分差异较大。不同巴西绿蜂胶样品间的化学成分基本一致,主要的化合物是酚酸类化合物:阿替匹林C、p-香豆酸、异绿原酸A和异绿原酸C;中国不同地区5个蜂胶样品都符合杨属型蜂胶的特征,主要成分是酚酸类化合物和黄酮类化合物,但不同样品各化合物的含量存在差异;澳大利亚蜂胶不同样品间呈现出较大的差异,既有符合杨属型蜂胶特征的样品,也有未知类型的样品。2.中国不同地区蜂胶的化学成分、抗氧化活性及谱效关系通过HPLC检测了中国不同地区的49个蜂胶样品,发现这些样品都符合杨属型蜂胶的特征,利用相似性分析和聚类分析发现部分采集自东北的蜂胶样品与其他样品存在显著差异。49个中国蜂胶都有较好的抗氧化能力,利用主成分分析和多元线性回归分析将抗氧化活性与HPLC图谱结合起来,构建活性指纹图谱;建立off-line DPPH-HPLC法,通过对比与DPPH溶液反应前后的样品的HPLC色谱峰的变化,筛选出蜂胶中具有抗氧化活性的物质有:咖啡酸、阿魏酸、山奈酚、未知物1、咖啡酸苄酯、短叶松素3-乙酸酯、CAPE和高良姜素。3.长白山蜂胶的化学成分和胶源植物对东北地区采集的104个蜂胶样品进行化学成分分析,结合样品采集信息,发现长白山蜂胶与其他地区的蜂胶有明显的区别,其中p-香豆酸和CBE两个化合物的含量在长白山蜂胶中更为丰富;对比长白山地区不同植物的HPLC图谱,初步判定长白山蜂胶的胶源植物是山杨和小叶杨。4.化合物CBE的分离纯化、制备鉴定及化学合成利用硅胶柱层析和羟丙基葡聚糖凝胶树脂柱分离纯化了化合物CBE,并经过制备液相色谱得到高纯度的CBE,经质谱和核磁共振鉴定化合物CBE是p-香豆酸苄酯,并利用酰氯法以p-香豆酸为原料合成了p-香豆酸苄酯。5.长白山蜂胶的抗癌活性利用CCK-8检测了长白山蜂胶醇提物对7种不同癌细胞的增殖抑制作用。结果表明长白山蜂胶对人胰腺癌细胞PANC1、人肺癌A549细胞、人结肠癌细胞HCT116、人肝癌细胞HepG2、人膀胱癌细胞T24和人乳腺癌MDA-MB-231的增殖抑制效果较弱。但是,长白山蜂胶能够显着抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,诱导细胞凋亡并调节细胞周期。同时长白山蜂胶能增加活性氧(ROS)的产生并降低线粒体膜电位(MMP)。Western blot和流式细胞仪结果表明,长白山蜂胶通过死亡受体途径和线粒体途径诱导细胞凋亡,并能调节细胞周期,从而抑制SGC-7901细胞的增殖。
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