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fat-1基因编码ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶,可以将多不饱和脂肪酸从ω-6形式转化为ω-3形式。ω-3多不饱和脂肪酸作为细胞构成的重要成分,一直以来受到人们的广泛关注。研究表明,哺乳动物体内一定的ω-3多不饱和脂肪酸含量,可以起到预防心血管疾病、神经退行性疾病甚至癌症的作用。但ω-3多不饱和脂肪酸在大多数动物体内不能合成,只能从食物中摄取。研究人员利用转基因的方法制备了能够表达fat-ι基因的转基因动物,如小鼠、猪等,为研究ω-3多不饱和脂肪酸的功能提供了高效、准确的医学、营养学动物模型。随着人们对ω-3多不饱和脂肪酸认识的增加,对富含这一成分的食品需求也将大大增加,fat-1基因在生产特殊农产品方面也具有十分大的潜力,亟待我们开发利用。本研究根据家兔基因密码子使用偏好性,对引自GenBank的秀丽隐杆线虫fat-1cDNA序列进行密码子优化,通过全基因合成的方法获得优化后的fat-1基因(命名为opfat-1);从秀丽隐杆线虫中RT-PCR扩增获得fat-1 cDNA。将扩增的fat-1cDNA和合成的opfat-1基因分别构建到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1中。采用脂质体Lipofectamine转染法将fat-1cDNA和opfat-1基因转入家兔胎儿成纤维细胞中。对比不同DNA和转染试剂用量以及细胞暴露于DNA、转染试剂中作用时间探讨影响家兔胎儿成纤维细胞转染效率的参数,通过绿色荧光标记、PCR和RT-PCR检测转染细胞中融合蛋白和目的基因的表达。结果表明：经过优化,最优的家兔胎儿成纤维细胞转染条件为：Lipofectamine用量为2-3μl,DNA量为0.8～1.0μg, Lipofectamine与DNA、细胞共培养时间为8h。荧光标记表明,密码子优化的opfat-1与fat-1 cDNA相比,体外瞬时表达效率有极为显著的提高；G418抗性筛选获得转基因单克隆细胞,PCR、RT-PCR初步验证fat-1 cDNA和opfat-1基因均在家兔胎儿成纤维细胞中稳定转录表达。作为阶段性成果,本研究的结果为进一步证fat-1基因功能性蛋白的表达及转fat-1基因克隆家兔的研究奠定坚实基础。